Anticuerpo Policlonal de Conejo Phospho-Smad2-S465/467 + Smad3-S423/425 para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q15796 / P84022

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de SMAD2 y SMAD3

• SMAD2 es un SMAD regulado por receptor (R-SMAD) que actúa como transductor de señal intracelular para las vías de TGF-beta y activina.
• Tras la unión del ligando, las quinasas del receptor tipo 1 fosforilan SMAD2 en el motivo C-terminal SSXS (Ser465 y Ser467), desencadenando su activación, la formación de complejos con SMAD4 y la translocación nuclear.
• En el núcleo, el complejo SMAD2/SMAD4 se une al elemento sensible a TGF-beta (TRE) en los promotores de genes diana y regula la transcripción.
• SMAD2 puede funcionar como un supresor tumoral en el carcinoma colorrectal. Referencias relacionadas: PMID:8752209
• Se expresa altamente en músculo esquelético, células endoteliales, corazón y placenta.
• SMAD3 es un homólogo cercano de SMAD2 y comparte mecanismos de activación similares. El anticuerpo detecta la fosforilación en los sitios correspondientes Ser423/425 en SMAD3.
• Las modificaciones postraduccionales clave incluyen fosforilación, acetilación y ubiquitinación; SMAD2 también contiene un sitio de unión a zinc.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético dirigido al motivo de bifosforilación, proporcionando especificidad para las formas activadas de SMAD2 y SMAD3. Verifique la especificidad fosforilada utilizando muestras tratadas con fosfatasa.
• Para Western blot, incluya inhibidores de fosfatasas durante la lisis para preservar la fosforilación y considere el uso de muestras frescas. Los pesos moleculares predichos de SMAD2 y SMAD3 son de alrededor de 48-52 kDa, pero pueden aparecer múltiples bandas debido a la fosforilación y los isoformas.
• Para inmunofluorescencia e inmunohistoquímica, la fijación estándar con PFA al 4% y la permeabilización con Triton X-100 pueden ser adecuadas; optimice la recuperación de antígenos para IHC-P.
• ELISA puede utilizarse para el cribado de alto rendimiento de la activación de la vía TGF-beta; se recomienda realizar pruebas de reactividad cruzada para estudios multiespecie.
• Siempre incluya controles positivos y negativos apropiados (p. ej., células tratadas con TGF-beta frente a no tratadas) para confirmar la especificidad fosforilada.

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