Anticuerpo monoclonal de conejo Phospho-Smad5 (S463/S465) para WB, ELISA - Q99717

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Smad5

• SMAD5 (Homólogo 5 de Mothers against decapentaplegic, también conocido como JV5-1, MADH5) es un regulador transcripcional perteneciente a la familia SMAD. Desempeña funciones esenciales en el desarrollo embrionario, la diferenciación celular, la angiogénesis y la homeostasis tisular. Referencias relacionadas: PMID:12064918 PMID:16516194

• Tras la estimulación con ligando BMP, SMAD5 es fosforilado en Ser463 y Ser465 por los receptores BMP de tipo I activados. Esta fosforilación promueve su asociación con SMAD4 para formar un complejo heteromérico que se transloca al núcleo, donde regula la expresión génica uniéndose a Elementos de Unión a Smad (SBEs) en regiones promotoras. Referencias relacionadas: PMID:9442019 PMID:33510867

• Además de su función como factor de transcripción, SMAD5 no fosforilado funciona en el citoplasma para regular el metabolismo energético. Mejora la respiración mitocondrial y la glucólisis al interactuar con la hexoquinasa 1 (HK1), acelerando así la glucólisis en respuesta a cambios en el pH citoplasmático. Referencias relacionadas: PMID:28675158

• La proteína se localiza en el citoplasma, el núcleo y la mitocondria, lo que refleja sus diversas funciones en señalización y metabolismo.

• SMAD5 se expresa de forma ubicua, lo que es consistente con su amplia participación en procesos celulares fundamentales.

• Las modificaciones postraduccionales clave incluyen la fosforilación en S463/S465 (crítica para la activación) y la acetilación. La proteína contiene dominios de unión a zinc y ha sido confirmada mediante secuenciación proteica directa.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético fosforilado que abarca el sitio de doble fosforilación (S463/S465). Considere usar controles de bloqueo con péptido no fosforilado para confirmar la especificidad de la fosforilación en Western blot.
• Para Western blot, el peso molecular predicho es de 52 kDa. Valide la banda en líneas celulares humanas relevantes tratadas con ligandos BMP para inducir la fosforilación de Smad5. Los lisados no tratados o tratados con fosfatasa pueden servir como controles negativos.
• En aplicaciones de ELISA, valore el anticuerpo para determinar la concentración de trabajo óptima. Las placas recubiertas con péptido fosfo pueden mejorar la especificidad.
• Dado que SMAD5 es ubicuo, asegúrese de que la preparación de la muestra y los controles de carga sean consistentes entre tejidos o tipos celulares.

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