Fosfo-SMO-S616 pAb de conejo - Q99835

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la proteína smoothened

• La proteína smoothened (SMO), también conocida como proteína Gx, es un receptor acoplado a proteína G (GPCR) que actúa como el transductor central de la vía de señalización de hedgehog, esencial para el desarrollo embrionario e implicado en el cáncer. Referencias relacionadas: PMID:19592253, PMID:27437577, PMID:28344083
• SMO se activa por la unión de colesterol tras la estimulación del ligando hedgehog, lo que conduce a la inhibición mediada por la proteína G G(i) de la adenilato ciclasa y a la reducción de los niveles de cAMP, lo que a su vez libera los factores de transcripción GLI para regular la expresión de genes diana. Referencias relacionadas: PMID:28344083, PMID:31168089
• Además de la modulación canónica del cAMP, la SMO activa secuestra e inhibe directamente la subunidad catalítica PRKACA de la proteína quinasa A (PKA) en la membrana celular, evitando la fosforilación y el procesamiento de los factores de transcripción GLI. Referencias relacionadas: PMID:36202993, PMID:39138140
• SMO también facilita la eliminación de GPR161, un regulador negativo clave, del cilio primario, garantizando una activación robusta de la vía (Por similitud). SMO se localiza en la membrana celular y se enriquece en la membrana del cilio primario, un nicho subcelular crítico para la transducción de señales.
• La proteína se modifica postraduccionalmente por fosforilación (incluyendo en Ser616), glicosilación, lipidación (unión a colesterol) y formación de enlaces disulfuro, como indican las palabras clave de UniProt, y se clasifica como un receptor transmembrana involucrado en la señalización del desarrollo.
• La disfunción de SMO se asocia con trastornos del desarrollo y cáncer; su actividad está regulada estrictamente por el inhibidor aguas arriba patched (PTCH1/2) y por el acceso al colesterol.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético fosforilado alrededor de la Ser616 del SMO humano, lo que garantiza la especificidad para la forma fosforilada; la reactividad cruzada no fosforilada debe evaluarse en controles negativos.
• Para el Western blot (WB), se espera una banda alrededor de 86 kDa; optimice el bloqueo y la dilución del anticuerpo para reducir el fondo debido a la expresión endógena de SMO.
• En ELISA y dot blot (DB), utilice péptido fosforilado como control positivo y péptido no fosforilado para confirmar la especificidad de la fosforilación; considere ensayos de competencia con péptidos para la validación.
• Dado que SMO se localiza en los cilios, la inmunodetección en lisados de células enteras puede ser un desafío; considere estrategias de enriquecimiento o inmunofluorescencia para estudios de localización ciliar.
• El anticuerpo presenta reactividad cruzada con el SMO humano; para otras especies, verifique la homología de secuencia en el sitio de fosforilación antes de su uso.

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