pAb de conejo Phospho-Src-Y529 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P12931

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Src

• La tirosina quinasa Src protooncogénica (c-Src) es una quinasa tirosina no receptora de ~60 kDa, codificada por el gen SRC (ID de gen: 6714). Sus nombres alternativos incluyen ASV, SRC1, THC6 y p60-Src. De la splicing alternativa surgen tres isoformas, siendo la isoforma 1 la secuencia canónica.
• Src media la transducción de señales de diversos tipos de receptores (inmunes, integrinas, factores de crecimiento, GPCR), controlando la transcripción genética, la respuesta inmune, la adhesión celular, la progresión del ciclo, la apoptosis, la migración y la transformación (PubMed:34234773, PubMed:21411625). Referencias relacionadas: PMID:34234773, PMID:21411625
• Mediante la fosforilación de sustratos como AFAP1, cortactina (CTTN), FAK (PTK2) y paxilina, Src organiza la reorganización del citoesqueleto, la dinámica de las adhesiones focales y la señalización de las uniones intercelulares.
• Src se localiza en la membrana celular, la membrana interna mitocondrial, el núcleo, el citoplasma, el citoesqueleto y las uniones celulares, lo que permite una señalización espacialmente restringida.
• El anticuerpo reconoce específicamente a Src fosforilado en Tyr529, un residuo conservado en la cola C-terminal cuya fosforilación por la quinasa Csk mantiene la conformación cerrada autoinhibida. La desfosforilación o el desplazamiento de la interacción pTyr529-SH2 prepara a Src para su activación.
• La expresión de Src es ubicua; sin embargo, las plaquetas, las neuronas y los osteoclastos presentan niveles de 5 a 200 veces mayores que la mayoría de los demás tejidos. También se ha detectado expresión en la piel (PubMed:22294297). Referencias relacionadas: PMID:22294297
• En osteoclastos, Src es esencial para la resorción ósea, actuando a través de un complejo PTK2B/PYK2 y fosforilando CBL para activar la señalización de PI3K (PubMed:14585963, PubMed:8755529). También promueve la producción de energía al activar la citocromo c oxidasa (PubMed:12615910). Referencias relacionadas: PMID:14585963, PMID:8755529, PMID:12615910
• Src participa en la inmunidad innata antiviral al potenciar la señalización mediada por RIG-I (PubMed:19419966) y media la regeneración epitelial impulsada por IL6 a través de la vía YAP1-NOTCH (PubMed:25731159). Referencias relacionadas: PMID:19419966, PMID:25731159

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético correspondiente a la región Y529; asegúrese de que la preparación de la muestra preserve la fosforilación (utilice inhibidores de fosfatasas) e incluya controles no fosforilados para verificar la especificidad.
• Para Western blot, el peso molecular predicho de Src es de ~60 kDa; debería observarse una banda de este tamaño. Considere utilizar bloqueo con BSA al 5% para reducir la unión no específica.
• En IHC-P e IF/ICC, los métodos de recuperación de antígeno pueden afectar la preservación del fosfoepítopo; se recomienda una recuperación suave basada en citrato y un procesamiento a baja temperatura.
• La detección por ELISA de Phospho-Src-Y529 se puede utilizar en combinación con anticuerpos contra Src total para evaluar los niveles de fosforilación sitio-específicos en lisados celulares.
• Se espera reactividad cruzada con Src de ratón y rata basada en la homología de secuencia; valide en el sistema de muestra correspondiente.

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