Anticuerpo monoclonal de conejo anti-CD146 humano para FC - P43121

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de CD146

• CD146, también denominado MUC18 o MCAM, es una glicoproteína de superficie celular perteneciente a la superfamilia de las inmunoglobulinas, codificada por el gen MCAM (GeneID: 4162). El empalme alternativo genera múltiples isoformas.
• Mediante la adhesión celular independiente de calcio y contribuye a la integridad de la monocapa endotelial en las uniones intercelulares del tejido vascular.
• En el melanoma, se considera que la expresión de CD146 permite a las células tumorales interactuar con el endotelio vascular, promoviendo así la diseminación hematógena y la metástasis.
• La proteína funciona como receptor de superficie, y la unión al ligando desencadena la fosforilación de tirosina de FYN y PTK2/FAK1, junto con un aumento transitorio de los niveles de calcio intracelular.
• Durante la embriogénesis, CD146 puede actuar como molécula de adhesión que guía la migración de las células de la cresta neural.
• Estudios de inmunolocalización muestran CD146 en la membrana plasmática; su región extracelular contiene dominios similares a inmunoglobulinas, sitios de glicosilación N-ligada y enlaces disulfuro, mientras que la cola citoplásmica sufre fosforilación.
• El peso molecular predicho es de aproximadamente 71,6 kDa; sin embargo, la proteína glicosilada madura migra como una banda de 57–71 kDa en SDS-PAGE.
• En tejidos adultos normales, CD146 se limita a las células de músculo liso y las células endoteliales, pero está fuertemente upregulado en melanomas primarios avanzados y lesiones metastásicas, lo que lo convierte en un marcador de progresión tumoral.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno (aa 24-559) cubre todo el dominio extracelular de CD146 humano, por lo que se espera que este anticuerpo reconozca la proteína nativa de superficie celular en células vivas sin fijar, un requisito fundamental para aplicaciones de citometría de flujo.
• Titule el anticuerpo en su ensayo de citometría de flujo para establecer una concentración óptima que proporcione una separación clara entre las poblaciones positivas y negativas.
• Incluya siempre controles de isotipo adecuados, controles de compensación monocromáticos y un tinte de viabilidad para excluir las células muertas del análisis.
• Valide la tinción en líneas celulares que expresan CD146 bien caracterizadas (por ejemplo, melanoma A375) o en muestras de tumor primario en las que se conoce que MCAM está upregulado.
• Debido a que es un fluoróforo sensible a la luz, almacene el conjugado protegido de la luz, evite ciclos repetidos de congelación-descongelación y centrifugue brevemente antes de cada uso para eliminar agregados.

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