Anticuerpo monoclonal de conejo anti-CD28 humano para citometría de flujo y estimulación de linfocitos T - P10747

Especificaciones y parámetros principales del producto

Contexto biológico: Función y localización de CD28

• CD28 (glicoproteína de superficie específica de linfocitos T CD28, también conocido como Tp44) es un miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas y funciona como receptor coestimulador esencial para la activación, proliferación y supervivencia de los linfocitos T.
• La unión de CD28 a sus ligandos CD80 (B7-1) o CD86 (B7-2) proporciona una segunda señal crítica que amplifica la señalización del receptor de linfocitos T (TCR), lo que conduce a una mayor producción de interleucina-2 (IL-2) y a la expansión de los linfocitos T. Referencias relacionadas: PMID:1650475, PMID:12196291, PMID:35397202
• La señalización de CD28 recluta la proteína quinasa C-theta (PRKCQ) y el adaptador GRB2, activando NF-κB a través de vías dependientes e independientes de PI3K/Akt para modular la expresión génica en los linfocitos T. Referencias relacionadas: PMID:24665965, PMID:21964608, PMID:7568038
• En conjunto con la costimulación de TCR/CD3 y CD40L, CD28 aumenta la producción de las citocinas Th2 IL-4 e IL-10, contribuyendo a las respuestas inmunitarias humorales. Referencias relacionadas: PMID:8617933
• CD28 actúa en sinergia con CD40L para activar NF-κB y las quinasas aguas abajo MAPK8 y PAK2, diversificando aún más las funciones efectoras de los linfocitos T. Referencias relacionadas: PMID:15067037
• CD28 se expresa predominantemente en la superficie celular de los linfocitos T y las células plasmáticas, pero está ausente en los linfocitos B menos maduros.
• La proteína CD28 es una glicoproteína transmembranal con un dominio extracelular similar a inmunoglobulina, una única hélice transmembranal y una cola citoplásmica que contiene motivos de señalización. Las modificaciones postraduccionales incluyen enlaces disulfuro, glicosilación y fosforilación.
• El empalme alternativo genera múltiples isoformas de CD28, que pueden ajustar con precisión las señales coestimuladoras en diferentes subpoblaciones de linfocitos T.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno, proteína CD28 humana recombinante, probablemente cubre el dominio extracelular, por lo que el anticuerpo es adecuado para detectar CD28 nativo de superficie celular mediante citometría de flujo. Realice una titulación en líneas celulares T humanas o PBMC para determinar la dilución de trabajo óptima.
• Para la activación de linfocitos T in vitro, utilice el anticuerpo en combinación con anti-CD3 para proporcionar señales coestimuladoras. Los formatos unidos a placa o entrecruzados pueden mejorar la agregación; los experimentos piloto deben optimizar la concentración y la duración de la estimulación.
• Cuando utilice este anticuerpo para bloqueo funcional o depleción, preincube con proteína CD28 recombinante para confirmar la especificidad de los efectos observados.
• Las estrategias de gating para citometría de flujo deben incluir la discriminación entre células vivas y muertas y controles de isotipo adecuados para cuantificar con precisión la expresión de CD28 en subpoblaciones de linfocitos T.
• Valide la reactividad cruzada en su sistema experimental; se informa que el anticuerpo reacciona con CD28 humano, pero se debe descartar la unión fuera de objetivo en el contexto de muestra correspondiente.

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