Anticuerpo monoclonal de conejo anti-CD326/EPCAM humano para FC - P16422

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la molécula de adhesión de células epiteliales

• La molécula de adhesión de células epiteliales (EPCAM), también designada como CD326, es una glicoproteína transmembrana de tipo I y miembro de la familia de transductores de señal de calcio asociados a tumores.
• Mediante la adhesión celular homofílica entre células epiteliales intestinales (IEC) y linfocitos intraepiteliales (IEL) en el epitelio mucosal, proporciona una barrera inmunológica contra infecciones mucosas.
• EPCAM participa en la proliferación y diferenciación de células madre embrionarias, regulando al alza la expresión de FABP5, MYC y las ciclinas A y E.
• La proteína se localiza en la membrana celular lateral y en las uniones estrechas, lo cual coincide con su función adhesiva.
• Se expresa de forma alta en células madre embrionarias indiferenciadas, y sus niveles disminuyen rápidamente después de la diferenciación; también está presente en casi todas las membranas de células epiteliales, pero no está en las membranas de células mesodérmicas y neurales.
• EPCAM se sobreexpresa con frecuencia en la superficie de adenocarcinomas, por lo que se clasifica como un antígeno tumoral y un objetivo para diagnósticos y terapias oncológicas.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen la formación de enlaces disulfuro y glicosilación; la proteína contiene un péptido señal y una hélice transmembrana.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca el dominio extracelular (aminoácidos 24–265), lo que indica que el anticuerpo se dirige a un epítopo accesible en la superficie celular, por lo que es adecuado para citometría de flujo sin permeabilización.
• Para citometría de flujo, realice una titulación del anticuerpo para determinar la concentración óptima para su sistema experimental, e incluya controles de isotipo apropiados para evaluar la unión inespecífica.
• Utilice centrifugación a baja velocidad y resuspensión suave para mantener la viabilidad celular, ya que EPCAM es un antígeno de superficie; evite digestiones enzimáticas severas que pueden cortar los epítopos extracelulares.
• Debido a la conjugación con el fluoróforo, proteja las muestras de la luz y analícelas rápidamente para minimizar el foto-blequeado.
• Valide la reactividad en líneas celulares derivadas de epitelio que expresan EPCAM, como MCF-7 (adenocarcinoma de mama) o HT-29 (adenocarcinoma colorrectal), teniendo en cuenta que los niveles de expresión pueden variar según el estado de diferenciación.
• Dado que EPCAM es un antígeno tumoral, considere estrategias de gating para distinguir las células epiteliales de las poblaciones no epiteliales en muestras mixtas.

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