Anticuerpo monoclonal de conejo anti-CD55 humano para citometría de flujo - P08174

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de CD55 (factor acelerador de la degradación del complemento)

• CD55, también conocido como factor acelerador de la degradación (DAF), es una proteína de membrana anclada mediante glucosilfosfatidilinositol (GPI) que pertenece a la familia de reguladores de la activación del complemento (RCA).
• Reconoce los fragmentos C4b y C3b depositados en las superficies celulares e interfiere con su capacidad para catalizar la conversión de C2 y del factor B, evitando así la formación de las convertasas de amplificación C4b2a y C3bBb. Referencias relacionadas: PMID:7525274
• Al desestabilizar e inhibir el ensamblaje de las convertasas C3 y C5, CD55 protege a las células autólogas de la lisis mediada por el complemento y del daño tisular. Referencias relacionadas: PMID:28657829
• Además de regular el complemento, CD55 actúa como receptor celular para diversos picornavirus, incluidos el virus coxsackie A21, los virus coxsackie B1, B3 y B5, los enterovirus humanos 70 y D68, y los echovirus 6, 7, 11, 12, 20 y 21.
• Se expresa en la membrana plasmática de prácticamente todas las células que entran en contacto con las proteínas del complemento plasmático, así como en las células epiteliales que revisten los compartimentos extracelulares; también se encuentran formas solubles en los fluidos corporales y en la matriz extracelular.
• La proteína contiene múltiples sitios de glucosilación ligada a N y cuatro dominios sushi (CCP) N-terminales, esenciales para la unión al ligando; el corte y empalme alternativo genera variantes ancladas a GPI y variantes secretadas.
• Desde el punto de vista clínico, las mutaciones en CD55 están relacionadas con el síndrome CHAPLE (hiperactivación del complemento, trombosis angiopática y enteropatía con pérdida de proteínas), y la molécula porta los antígenos del grupo sanguíneo Cromer.
• El polipéptido maduro tiene una masa prevista de aproximadamente 41 kDa, pero la glucosilación extensa da lugar a un patrón de bandas heterogéneo de entre 39 kDa y 59 kDa en la transferencia Western.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno cubre todo el dominio extracelular (aa 35–353), lo que sugiere que el anticuerpo se une a CD55 nativo en células vivas; valide la tinción en condiciones no permeabilizantes para la detección en superficie.
• Para la citometría de flujo, realice una titulación del anticuerpo en un intervalo de 0,1–5 µg/mL utilizando células mononucleares de sangre periférica humana o líneas celulares transfectadas con CD55 para determinar la concentración óptima.
• Incluya controles de isotipo adecuados y reactivos de bloqueo de los receptores Fc para minimizar la unión inespecífica, especialmente en muestras con alta expresión de FcγR.
• Dado que CD55 se desprende de la membrana, considere teñir tanto las células primarias como los sobrenadantes correspondientes si está investigando formas solubles.
• Verifique la reactividad cruzada en su sistema experimental específico; se ha informado que el anticuerpo reacciona con CD55 humano, pero su rendimiento en primates no humanos o modelos de roedores debe confirmarse individualmente.

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