Anticuerpo monoclonal de conejo anti-FAP humano para FC - Q12884

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la prolil endopeptidasa FAP

• La prolil endopeptidasa FAP (FAP) es una serina proteasa glicoproteica de superficie celular, también conocida como proteína alfa de activación de fibroblastos, seprasa y gelatinasa unida a membrana de melanoma de 170 kDa. Existen múltiples isoformas debido al splicing alternativo.
• La FAP presenta tanto actividad endopeptidasa de escisión post-prolina como actividad dipeptidil peptidasa. La actividad endopeptidasa se dirige a sustratos con secuencias Ala/Ser-Gly-Pro-Ser/Asn/Ala, como el alfa-2-antiplasmina y SPRY2. Referencias relacionadas: PMID:14751930, PMID:16223769, PMID:16410248
• La actividad dipeptidil peptidasa hidroliza enlaces prolílicos en dipeptidos sintéticos y actúa sobre neuropéptidos naturales como NPY, PYY, sustancia P y BNP32. Referencias relacionadas: PMID:10347120, PMID:10593948, PMID:16175601, PMID:21314817
• La FAP degrada gelatina y colágeno de tipo I desnaturalizado por calor, pero no los colágenos nativos de tipo I y IV, vitronectina, tenascina, laminina, fibronectina, fibrina o caseína, contribuyendo a la remodelación de la matriz extracelular. Referencias relacionadas: PMID:10347120, PMID:10455171, PMID:12376466
• A través de sus actividades proteasicas, la FAP regula la proteólisis pericelular, promoviendo la adhesión celular, la migración y la invasión. Desempeña funciones en la remodelación tisular, la fibrosis, la cicatrización de heridas, la inflamación y la progresión tumoral, incluyendo la potenciación de la angiogénesis y la evasión inmune.
• A nivel subcelular, la FAP se localiza en la superficie celular y la membrana, particularmente en proyecciones celulares como lamelipodios, invadopodios y pliegues membranosos. También se secretan formas solubles al espacio extracelular y se detectan en el citoplasma.
• La expresión tisular está en gran medida restringida a fibroblastos activados en condiciones patológicas: heridas en cicatrización, hígado cirrótico (células estrelladas hepáticas), tejidos sinoviales inflamados y estroma reactivo de cánceres epiteliales. Se expresa altamente en células de glioma y líneas de melanoma, pero está ausente en el hígado normal. El tejido adiposo también expresa FAP.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen glicosilación y formación de enlaces disulfuro; se sintetiza como una proteína de membrana de tipo II de paso único con un anclaje de señal.

Guía experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo está diseñado para aplicaciones de citometría de flujo (FC). El inmunógeno abarca los aminoácidos 26-760 de la FAP humana, cubriendo el dominio extracelular. El fluoróforo permite la detección directa sin necesidad de reactivos secundarios, lo que reduce la señal de fondo.
• Para la tinción de superficie celular en células vivas, incube con el anticuerpo sobre hielo en tampón de bloqueo. Para la detección de FAP intracelular o total, considere protocolos de fijación y permeabilización.
• La concentración óptima del anticuerpo debe determinarse mediante titulación en el sistema celular correspondiente. Incluya controles de isotipo apropiados y tintes de viabilidad para excluir células muertas del análisis.
• Dado que la FAP se expresa en fibroblastos activados del estroma tumoral y tejidos en cicatrización, utilice controles positivos y negativos apropiados (por ejemplo, fibroblastos asociados a cáncer positivos para FAP frente a fibroblastos de tejido normal o líneas celulares negativas para FAP).
• Debido a una posible desprendimiento, pueden existir formas secretadas de FAP en el sobrenadante; para una tinción de superficie precisa, lave las células completamente antes de la tinción.

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