Anticuerpo monoclonal de conejo anti-IgG humana (Fc) para citometría de flujo - P01857

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de la IgG (Fc)

• El objetivo es la región constante (Fc) de la cadena pesada gamma-1 de la inmunoglobulina humana (IgG1), codificada por el gen IGHG1, correspondiente a los aminoácidos 100-330 de la proteína madura (UniProt P01857). Esta región media las funciones efectoras mediante la interacción con los receptores Fc y el complemento.
• Las cadenas pesadas de las inmunoglobulinas son esenciales para la inmunidad adaptativa: la Ig unida a la membrana actúa como receptor de los linfocitos B, mientras que los anticuerpos secretados neutralizan los patógenos. La región Fc de la IgG1 desencadena específicamente la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos, la citotoxicidad dependiente del complemento y la fagocitosis (PubMed:17576170, PubMed:20176268, PubMed:22158414). Referencias relacionadas: PMID:17576170 PMID:20176268 PMID:22158414
• La IgG1 está formada por dos cadenas pesadas idénticas unidas mediante enlaces disulfuro a dos cadenas ligeras; cada cadena pesada contiene un dominio variable (codificado por segmentos V, D y J) y tres dominios constantes (CH1, CH2 y CH3). Los dominios CH2 y CH3 forman el fragmento Fc al que se dirige este anticuerpo.
• El gen IGHG1 forma parte del locus de la cadena pesada de las inmunoglobulinas en el cromosoma 14, y la recombinación de cambio de clase de IgM/IgD a IgG1 ocurre en los linfocitos B activados, configurando el repertorio de anticuerpos.
• La IgG1 es el isotipo de anticuerpo más abundante en el suero humano y es fundamental para la inmunidad humoral a largo plazo; además, se utiliza con frecuencia como estructura base para anticuerpos terapéuticos.
• Localización subcelular: las cadenas pesadas de IgG1 se secretan como anticuerpos o se muestran en la superficie de los linfocitos B como inmunoglobulinas unidas a la membrana (forma transmembrana).
• Las modificaciones postraduccionales incluyen la formación de enlaces disulfuro y la N-glucosilación en el dominio CH2 conservado, esencial para la unión a los receptores Fc y la estabilidad.
• Palabras clave: inmunidad adaptativa, secretada, membrana celular, glucoproteína, dominio de inmunoglobulina, enlace disulfuro.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El anticuerpo está conjugado con , un fluoróforo fotoestable con máximos de excitación/emisión de aproximadamente 590/617 nm, compatible con los citómetros de flujo estándar. Asegúrese de utilizar los ajustes adecuados del instrumento y realizar la compensación.
• Para la citometría de flujo, titule el anticuerpo para determinar la concentración óptima de tinción (normalmente, 0,5-5 µg por cada 10^6 células) utilizando células de control positivas y negativas que expresen IgG humana (por ejemplo, linfocitos B humanos o líneas celulares que expresen IgG de membrana).
• Dado que el anticuerpo reconoce la región Fc, puede unirse a la IgG libre presente en el suero o el medio de cultivo; lave las células minuciosamente para reducir el fondo.
• Este clon puede utilizarse para detectar IgG de superficie en linfocitos B humanos o para identificar partículas recubiertas de IgG o complejos inmunitarios en entornos de investigación.
• Evite una fijación o permeabilización agresiva que pueda alterar el epítopo Fc; la fijación suave con paraformaldehído (1-4 %) suele ser compatible.
• Utilice reactivos de bloqueo de los receptores Fc al teñir células con una alta expresión de FcγR para evitar la unión inespecífica.
• Considere validar la reactividad cruzada con otras subclases de IgG (IgG2, IgG3 e IgG4) si es necesario, ya que las secuencias de la región Fc presentan una alta homología.

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