Anticuerpo monoclonal de conejo anti-LAMP2 humano para IF/ICC y FC intracelular - P13473

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de LAMP2

• LAMP2 (glucoproteína 2 de membrana asociada a los lisosomas), también conocida como CD107b, LAMP-2, LGP-96 o LGP110, es una proteína transmembrana altamente glucosilada codificada por el gen LAMP2. Mediante corte y empalme alternativo, produce tres isoformas principales: LAMP-2A, LAMP-2B y LAMP-2C, que difieren en sus colas citosólicas y presentan distribuciones tisulares distintas.
• Como glucoproteína clave de la membrana lisosomal, LAMP2 desempeña un papel esencial en la biogénesis lisosomal y la regulación del pH al actuar como inhibidor directo del canal de protones TMEM175, facilitando así la acidificación lisosomal y una actividad óptima de las hidrolasas. Referencias relacionadas: PMID:37390818
• LAMP2 es un mediador central de la autofagia mediada por chaperonas (CMA), una vía de degradación selectiva. Se une a complejos de chaperonas citosólicas (p. ej., HSPA8/HSC70) que transportan proteínas diana como GAPDH, GPX4, NLRP3 y MLLT11 hasta la membrana lisosomal, donde LAMP2 actúa como receptor para translocar los sustratos al lisosoma para su degradación. Referencias relacionadas: PMID:11082038, PMID:18644871, PMID:24880125, PMID:36586411
• LAMP2 es necesario para la fusión de los autofagosomas con los lisosomas durante la macroautofagia; las células que carecen de LAMP2 no logran acumular STX17 en los autofagosomas, lo que impide la fusión y altera la degradación de la carga autofágica. Referencias relacionadas: PMID:27628032
• LAMP2 facilita la presentación eficiente de antígenos exógenos mediada por el MHC de clase II al permitir la degradación lisosomal y la posterior carga de péptidos antigénicos en moléculas de MHC II nacientes, aunque no es indispensable para la presentación de antígenos endógenos. Referencias relacionadas: PMID:15894275, PMID:20518820
• A nivel subcelular, LAMP2 se localiza principalmente en la membrana lisosomal, pero también se encuentra en membranas endosómicas, autofagosómicas y plasmáticas, lo que refleja su tráfico dinámico y sus funciones en las vías endolisosómicas y autofágicas.
• Se observan patrones de expresión específicos de cada isoforma: LAMP-2A se expresa altamente en la placenta, los pulmones y el hígado, mientras que LAMP-2B y LAMP-2C presentan distribuciones distintas en tejidos como el bazo, el timo, el cerebro y el intestino delgado. Referencias relacionadas: PMID:26856698, PMID:7488019
• Cabe destacar que LAMP2 está asociada con la enfermedad de Danon, un trastorno del almacenamiento de glucógeno, y su estudio incluye palabras clave como corte y empalme alternativo, autofagia, enlace disulfuro, glucoproteína y hélice transmembrana.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 29-375 de LAMP2 humano, cubriendo un amplio dominio luminal común a todas las isoformas; esta amplia cobertura permite detectar múltiples variantes de LAMP2 cuando la homología de secuencia lo permite.
• El anticuerpo está conjugado directamente con , lo que permite una tinción en un solo paso para inmunofluorescencia (IF/ICC) y citometría de flujo intracelular (FC intra) sin necesidad de anticuerpos secundarios.
• Para la citometría de flujo intracelular, se requieren fijación y permeabilización; utilice protocolos estándar (p. ej., fijación con PFA al 4% seguida de permeabilización con saponina o Triton X-100) y optimice los tiempos de incubación y las concentraciones de anticuerpo para su tipo celular específico.
• Valide el rendimiento del anticuerpo en el sistema biológico relevante (humano) e incluya controles positivos y negativos adecuados (p. ej., células de tipo salvaje frente a células con disminución de LAMP2) para confirmar la especificidad.
• Dado que LAMP2 está altamente glucosilada y existe en múltiples isoformas, el peso molecular aparente en Western blot puede diferir de los 44-45 kDa previstos; las pruebas mediante WB no están indicadas, por lo que, si es necesario, considere realizar experimentos piloto para verificar la capacidad de detección.

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