Anticuerpo monoclonal de conejo anti-fosfo-PI3K p85α (Y467)/p85β (Y464)/p55γ (Y199) humano para citometría de flujo (intracelular) - P27986 / O00459 / Q92569

Especificaciones y parámetros principales del producto

Contexto biológico: Función y localización de las subunidades regulatorias de PI3K (p85α/p85β/p55γ)

• La subunidad reguladora alfa de fosfatidilinositol 3-quinasa (PIK3R1) codifica la subunidad reguladora p85α, que presenta múltiples isoformas por empalme alternativo, incluyendo la isoforma 2 expresada en músculo esquelético y cerebro, y en niveles más bajos en riñón y músculo cardíaco.
• Contiene un dominio SH3 y dos dominios SH2 que median la unión a residuos de tirosina fosforilados en receptores de tirosina quinasa activados y proteínas adaptadoras, uniendo las subunidades catalíticas p110 a la membrana plasmática.
• Funciona como adaptador crítico en la señalización de PI3K/AKT, necesario para la captación de glucosa estimulada por insulina y la síntesis de glucógeno; también actúa aguas abajo de FGFR, KIT, PDGFRA/B e ITGB2. Referencias relacionadas: PMID:17626883, PMID:19805105, PMID:7518429
• Modula la respuesta al estrés del retículo endoplásmico al promover la translocación nuclear de la isoforma 2 de XBP1, mejorando la tolerancia hepática a la glucosa bajo sobrecarga metabólica. Referencias relacionadas: PMID:20348923
• Las subunidades regulatorias p85β (PIK3R2) y p55γ (PIK3R3) comparten homología estructural con p85α y contienen sitios de fosforilación análogos, aunque su distribución tisular y funciones específicas pueden variar.
• Las palabras clave de UniProt incluyen Fosfoproteína, dominio SH2, dominio SH3, Empalme alternativo, Citoplasma y conjugación Ubl; la proteína está sujeta a acetilación y ubiquitinación.
• La localización subcelular es principalmente citoplasmática, donde interactúa con receptores unidos a membrana.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético correspondiente a Y467 de la PI3K p85α humana; la reactividad cruzada con los sitios fosforilados homólogos en p85β (Y464) y p55γ (Y199) se basa en la conservación de la secuencia, pero se debe verificar la alineación de secuencias para considerar posibles efectos fuera de objetivo.
• Para citometría de flujo intracelular, optimice los protocolos de permeabilización y fijación para preservar los fosfoepítopos; utilice controles fosfoespecíficos apropiados y condiciones de estimulación (por ejemplo, ayuno de suero seguido de tratamiento con factor de crecimiento) para confirmar la especificidad de la señal.
• Dado que el anticuerpo está conjugado directamente con , no se necesita anticuerpo secundario, lo que reduce el fondo; incluya controles de compensación apropiados al realizar multiplexación con otros fluoróforos.
• Considere validar en líneas celulares humanas relevantes que se sabe expresan subunidades de PI3K y fosforilan estos sitios tras la activación de receptores de insulina o factores de crecimiento.

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