Anticuerpo monoclonal de conejo anti-Fosfo-PI3K humana p85α (Y467)/p85β (Y464)/p55γ (Y199) para citometría de flujo intracelular - P27986 / O00459 / Q92569

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de las subunidades reguladoras de PI3K (p85α/p85β/p55γ)

• La subunidad reguladora p85α de la fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K) (codificada por PIK3R1) es una proteína adaptadora que desempeña un papel fundamental en la mediación de la activación de la vía de señalización PI3K/AKT. Contiene dominios SH2 y SH3 que se unen a residuos de tirosina fosforilados en receptores de tirosina cinasa activados y proteínas adaptadoras, reclutando la subunidad catalítica p110 a la membrana plasmática para producir PIP3 y propagar señales descendentes. Referencias relacionadas: PMID:17626883, PMID:19805105, PMID:7518429
• Este anticuerpo está diseñado para reconocer las formas fosforiladas de tres subunidades reguladoras de PI3K: p85α (PIK3R1), p85β (PIK3R2) y p55γ (PIK3R3), específicamente en los sitios conservados de fosforilación de tirosina Y467 (p85α), Y464 (p85β) e Y199 (p55γ). Estos eventos de fosforilación están asociados con la activación de la señalización de PI3K aguas abajo de los receptores de factores de crecimiento.
• p85α es necesaria para la captación de glucosa estimulada por insulina y la síntesis de glucógeno en tejidos sensibles a la insulina, y desempeña un papel en la señalización en respuesta a varios receptores de factores de crecimiento (p. ej., FGFR, KIT, PDGFR). También modula la respuesta celular al estrés en el retículo endoplásmico al promover la translocación nuclear de la isoforma 2 de XBP1, contribuyendo así a la mejora de la tolerancia a la glucosa. Referencias relacionadas: PMID:20348923
• A nivel subcelular, p85α se localiza predominantemente en el citoplasma, donde interactúa con receptores unidos a la membrana tras la estimulación.
• La isoforma 2 de p85α muestra expresión específica de tejido, estando presente en el músculo esquelético y el cerebro, y a niveles más bajos en el riñón y el músculo cardíaco. A nivel proteico, las isoformas 2 y 4 se detectan en el músculo esquelético.
• Las modificaciones postraduccionales clave incluyen la fosforilación en residuos de tirosina y serina/treonina, acetilación y ubiquitinación, que regulan su estabilidad e interacción con socios de señalización. p85α también participa en las interacciones huésped-virus.

Guía experimental y consejos técnicos

• Para la citometría de flujo de fosfo-intracelular, considere el uso de protocolos de fijación/permeabilización optimizados para la preservación de epítopes fosforilados. La preincubación con inhibidores de fosfatasas puede mejorar la estabilidad de la señal.
• Valide la tinción con los controles positivos y negativos apropiados (p. ej., células humanas no tratadas frente a células estimuladas con factores de crecimiento) para confirmar la especificidad fosforilada.
• Dado que este anticuerpo está conjugado directamente con , realice experimentos de titulación para determinar la concentración óptima para su tipo celular y condiciones experimentales.
• Asegúrese de que el fluoróforo elegido sea compatible con su panel de citometría de flujo y la configuración de su instrumento.

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