Conejo anti-Humano Fosfo-PI3KP85α-Y467+P85β-Y464+P55γ-Y199 mAb - P27986 / O00459 / Q92569

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de las subunidades reguladoras de PI3K (p85α/p85β/p55γ)

• PIK3R1 codifica la subunidad reguladora p85α de PI3K, la cual existe como múltiples isoformas (p85α, p55α, p50α) mediante splicing alternativo. La isoforma p85α es la proteína de longitud completa, mientras que las isoformas más cortas carecen del dominio SH3 N-terminal y de la región de homología BH. Este anticuerpo reconoce formas fosforiladas de los tres productos génicos PIK3R1 (p85α), PIK3R2 (p85β) y PIK3R3 (p55γ).
• Las subunidades reguladoras se unen a las proteína-tirosina quinasas activadas (fosforiladas) a través de sus dominios SH2, funcionando como moléculas adaptadoras que reclutan la subunidad catalítica p110 a la membrana plasmática, activando así la señalización de PI3K. Referencias relacionadas: PMID:17626883 PMID:19805105 PMID:7518429
• Las subunidades reguladoras de PI3K son esenciales para la captación de glucosa estimulada por insulina y la síntesis de glucógeno en tejidos sensibles a la insulina como el músculo esquelético y el hígado. También median la señalización corriente abajo de los receptores de factores de crecimiento (FGFR1-4, PDGFR, KIT) y la integrina ITGB2. Referencias relacionadas: PMID:17626883 PMID:7518429
• p85α modula la respuesta celular al estrés del retículo endoplasmático (ER) al promover la translocación nuclear de la isoforma 2 de XBP1 de manera dependiente del estrés del ER y/o de la insulina, particularmente durante la sobrecarga metabólica en el hígado, mejorando así la tolerancia a la glucosa. Referencias relacionadas: PMID:20348923
• Las subunidades p85α/p85β/p55γ son principalmente citoplasmáticas, donde se asocian con la subunidad catalítica p110. Tras la activación, son reclutadas a la membrana plasmática para localizar la holoenzima PI3K cerca de sus sustratos lipídicos.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen la fosforilación en múltiples residuos de tirosina (p. ej., Y467 de p85α, Y464 de p85β, Y199 de p55γ) por quinasas de tirosina receptoras y no receptoras, lo cual es crítico para regular la actividad de PI3K y las interacciones proteína-proteína. Las modificaciones adicionales incluyen acetilación y ubiquitinación.
• La isoforma 2 de PIK3R1 (p55α) se expresa altamente en músculo esquelético y cerebro, con niveles más bajos en riñón y músculo cardíaco. A nivel proteico, tanto la isoforma 2 como la isoforma 4 (p50α) se detectan en el músculo esquelético, lo que sugiere roles específicos del tejido en la señalización de insulina y el metabolismo.
• Las mutaciones en PIK3R1 se asocian con el síndrome SHORT (estatura baja, hiperextensibilidad, depresión ocular, anomalía de Rieger y retraso en la dentición) y otros trastornos relacionados con el crecimiento, destacando su papel en el desarrollo y la señalización del factor de crecimiento similar a la insulina.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético que abarca Y467 de p85α humana. Asegúrese de que su sistema experimental preserve la fosforilación; use inhibidores de fosfatasas durante la preparación de la muestra y considere las condiciones de estimulación (p. ej., insulina, factores de crecimiento) para mejorar la detección del epítopo fosforilado.
• Este anticuerpo está validado para citometría de flujo intracelular (FC). Para una tinción óptima, fije y permeabilice las células utilizando protocolos compatibles con la detección específica de fosfo (p. ej., fijación con formaldehído seguida de permeabilización con metanol). Titule el anticuerpo para determinar la dilución óptima para su tipo celular y condiciones de tratamiento.
• Dado que el anticuerpo reconoce la fosfo-Y467 de p85α, la fosfo-Y464 de p85β y la fosfo-Y199 de p55γ, el rango de peso molecular observado puede variar. En la transferencia Western (si se intenta), las bandas pueden aparecer entre 42-54 kDa (para isoformas más cortas) y 81-84 kDa (para p85α/p85β de longitud completa). Ejecute controles positivos apropiados (p. ej., células HepG2 o HeLa estimuladas con insulina) y verifique la especificidad mediante tratamiento con fosfatasa.
• Considere el uso de este anticuerpo en combinación con anticuerpos de subunidades reguladoras totales de PI3K para evaluar las relaciones de fosforilación en estudios de señalización. Para FC cuantitativa, asegúrese de que el fluoróforo sea compatible con la configuración de su citómetro y de que se incluyan controles de compensación si se realiza multiplexación.
• Se informa reactividad cruzada para humano. Si trabaja con otras especies, valide la conservación de los sitios de fosforilación diana mediante alineación de secuencias antes de su uso.

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