Anticuerpo monoclonal de conejo anti-Humano Siglec-8 para FC - Q9NYZ4

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Siglec-8

• Siglec-8 (lectina tipo Ig de unión a ácido siálico 8), también designado como miembro 2 de la familia sialoadhesina (SAF-2), es un miembro de familia de lectinas sialoadhesina.
• Es una molécula de adhesión putativa que media la unión dependiente de ácido siálico a las células sanguíneas. Referencias relacionadas: PMID:10625619 PMID:10856141
• Siglec-8 se une preferentemente al ácido siálico unido α-2,3 y, en menor medida, al ácido siálico unido α-2,6; las interacciones cis en la misma superficie celular pueden enmascarar el sitio de unión. Referencias relacionadas: PMID:10625619
• Reconoce el ácido N-acetilneuramínico terminal (ácido siálico) con una galactosa subyacente sulfatada en 6-O, mostrando preferencia por los epítopes de glicano sialil-Lewis X sulfatados en Gal-6. Referencias relacionadas: PMID:27357658
• La proteína es una glicoproteína de membrana de tipo I de un solo paso que contiene dominios tipo inmunoglobulina, un péptido señal y una hélice transmembrana; presenta puentes disulfuro y posibles sitios de glicosilación.
• La expresión está muy restringida a las células sanguíneas, principalmente basófilos, células cebadas y eosinófilos.
• El splicing alternativo genera isoformas con pesos moleculares predichos de 44 kDa, 46 kDa y 54 kDa.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno (dominio extracelular, aa 17–363) sugiere que el anticuerpo reconoce la región proximal a la membrana del Siglec-8 humano; considere verificar la tinción de la superficie celular frente a la tinción intracelular en su ensayo.
• Dado que se trata de un anticuerpo conjugado directamente con , no se requiere ningún paso de tinción secundaria; asegúrese de una exposición mínima a la luz y fije las células si es necesario para la citometría de flujo.
• Titule el anticuerpo para determinar la concentración óptima para su tipo de muestra específico; las diluciones iniciales típicas van de 1:50 a 1:200, pero esto debe validarse empíricamente.
• Utilice un control de isotipo apropiado conjugado con el mismo fluoróforo para evaluar la unión de fondo.
• La expresión de Siglec-8 está restringida a basófilos, células cebadas y eosinófilos; realice una tinción simultánea con marcadores de linaje (p. ej., CD45, CD3, CD19, CD16, CD123, HLA-DR) para confirmar las poblaciones celulares.
• Para la tinción de sangre total, considere la lisis de glóbulos rojos o la separación por gradiente de densidad para enriquecer los leucocitos, y valide las estrategias de gating con controles positivos y negativos conocidos.

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