Anticuerpo monoclonal de conejo anti-Siglec-8 humano para citometría de flujo - Q9NYZ4

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Siglec-8

• Siglec-8 es una lectina similar a inmunoglobulina que se une al ácido siálico, también conocida como miembro 2 de la familia de las sialoadhesinas (SAF-2). Está codificada por el gen SIGLEC8 y pertenece a la subfamilia de Siglec relacionada con CD33.
• Actúa como una supuesta molécula de adhesión que media la unión dependiente de ácido siálico a las células sanguíneas, reconoce preferentemente el ácido siálico unido por enlace α2,3 y también se une al ácido siálico unido por enlace α2,6. Referencias relacionadas: PMID:10625619 PMID:10856141
• Reconoce epítopos que requieren un ácido N-acetilneuramínico terminal (ácido siálico) y una galactosa 6-O-sulfatada subyacente, con preferencia por los glicanos de Lewis X sialilados sulfatados en Gal-6. Referencias relacionadas: PMID:27357658
• El sitio de reconocimiento del ácido siálico puede estar enmascarado por interacciones cis con los ácidos siálicos de la misma superficie celular, modulando su actividad de unión.
• Se expresa específicamente en la superficie de eosinófilos, basófilos y mastocitos, lo que indica su papel en las respuestas alérgicas e inflamatorias.
• Subcelularmente se localiza en la membrana, lo que coincide con su función de receptor transmembrana.
• Contiene un péptido señal N-terminal, dominios extracelulares similares a inmunoglobulina (tipo V y tipo C2 similares a Ig), una hélice transmembrana y una cola citoplásmica; está clasificada como una glicoproteína con enlaces disulfuro.
• Existen múltiples isoformas de la proteína debido al empalme alternativo, y se han reportado pesos moleculares de 44kDa, 46kDa y 54kDa.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es una proteína recombinante que abarca los aminoácidos 17 a 363, que cubre la región extracelular, lo que probablemente garantiza el reconocimiento de Siglec-8 nativo expresado en superficie.
• Este anticuerpo está validado para citometría de flujo (FC); considere realizar una titulación desde 0,1 a 1 μg por ensayo para determinar la concentración óptima de tinción para su población celular.
• Para la tinción de sangre entera humana o PBMC, incluya un paso de bloqueo de los receptores Fc y controles de isotipo apropiados para minimizar la unión no específica.
• Verifique doblemente la especificidad comparando la tinción en células primarias positivas para Siglec-8 (eosinófilos, basófilos) con linfocitos negativos para Siglec-8.
• Debido al posible enmascaramiento cis del epítopo, verifique que el tratamiento de las células con sialidasa no altere la unión del anticuerpo si es necesario para su ensayo.
• Utilice una puerta de selección de células viables y, si va a fijar, asegúrese de que las condiciones de fijación/permeabilización no distorsionen el epítopo reconocido por el anticuerpo.

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