Anticuerpo monoclonal de conejo anti-TNF-α humano para citometría de flujo (intracelular) - P01375

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización del TNF-α

• El factor de necrosis tumoral (TNF-α), también conocido como caquectina y TNFSF2, es una citocina de 26 kDa codificada por el gen TNF en el cromosoma 6p21.3.

• >Secretado principalmente por los macrófagos, el TNF-α funciona como un potente pirógeno endógeno, induciendo fiebre directamente y a través de IL-1, y es un mediador clave de la caquexia en la inflamación crónica y el cáncer.

• Se une a TNFRSF1A/TNFR1 y TNFRSF1B/TNFBR, desencadenando cascadas de señalización que regulan la supervivencia celular, la apoptosis y la diferenciación en una amplia gama de tipos celulares.

• La citocina se sintetiza como una proteína transmembrana de tipo II; su dominio ectodominio soluble se libera por TACE/ADAM17, lo que permite actividades locales de tipo yuxtacrina y sistémicas de tipo endocrino.

• Las modificaciones postraduccionales incluyen glicosilación, formación de enlaces disulfuro, miristoilación y fosforilación, que son críticas para el plegamiento, el tráfico y la unión al receptor adecuados.

• En la artritis reumatoide, el TNF-α promueve la inflamación autoinmune al deteriorar la función de las células T reguladoras (Treg) mediante la desfosforilación mediada por PP1 y la inactivación del factor de transcripción FOXP3 (PubMed:23396208).

  Referencias relacionadas: PMID:23396208

• El TNF-α contribuye a la inmunidad antitumoral al mediar la citotoxicidad dependiente de neutrófilos contra las células de cáncer de vejiga en combinación con fármacos miméticos de SMAC (PubMed:16829952, PubMed:22517918).

  Referencias relacionadas: PMID:16829952, PMID:22517918

• Induce sinérgicamente la producción de VEGF junto con IL-1β e IL-6 para promover la angiogénesis (PubMed:12794819) y estimula la osteoclastogénesis, impulsando la destrucción ósea en enfermedades inflamatorias (Por similitud).

  Referencias relacionadas: PMID:12794819

Guía experimental y consejos técnicos

• Dado que el inmunógeno abarca el dominio extracelular (aminoácidos 77-233), se espera que el anticuerpo reconozca tanto la forma unida a membrana como la soluble del TNF-α.
• Para la citometría de flujo intracelular, asegure los protocolos adecuados de permeabilización y fijación para permitir el acceso al TNF-α citoplasmático; considere el uso de un control positivo conocido, como monocitos activados.
• Valide el anticuerpo en el sistema de muestra relevante; se puede usar sangre humana total o PBMC estimulados con LPS para inducir la expresión de TNF-α para la tinción intracelular.
• Dado que el TNF-α se secreta, se recomienda un inhibidor del transporte de proteínas (por ejemplo, brefeldina A o monensina) durante la estimulación celular para acumular la proteína intracelular.
• Tenga cuidado de evitar la unión inespecífica mediante la titulación del anticuerpo y el uso de controles de isotipo apropiados.

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