Anticuerpo monoclonal de conejo anti-TNF-α humano para citometría de flujo intracelular - P01375

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización del factor de necrosis tumoral

• El factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), también conocido como caquectina o TNFSF2, es una citoquina clave de la superfamilia TNF y existe tanto en forma transmembrana como soluble. La forma soluble se deriva de la escisión proteolítica del precursor unido a la membrana.
• El TNF-α se une a sus receptores TNFRSF1A/TNFR1 y TNFRSF1B/TNFBR, desencadenando vías de señalización que conducen a la apoptosis, la supervivencia celular, la inflamación y la modulación inmune. Es un pirógeno potente, que causa fiebre directamente o mediante la inducción de IL-1, y participa en la inducción de caquexia.
• En la artritis reumatoide, el TNF-α altera la función de las células T reguladoras al aumentar la proteína fosfatasa 1 (PP1), que desfosforila FOXP3 en Ser-418, inactivando así FOXP3 y haciendo que las células Treg sean funcionalmente defectuosas. Referencias relacionadas: PMID:23396208
• El TNF-α actúa como mediador de la muerte celular en las respuestas inmunes antitumorales, ejemplificado por su papel con los neutrófilos estimulados por BCG y miméticos DIABLO/SMAC en células de cáncer de vejiga. Referencias relacionadas: PMID:16829952, PMID:22517918, PMID:23396208
• Promueve la angiogénesis al inducir sinérgicamente la producción de VEGF con IL1B e IL6. Referencias relacionadas: PMID:12794819
• El TNF-α induce resistencia a la insulina en los adipocitos al inhibir la fosforilación de tirosina de IRS1 inducida por insulina y la captación de glucosa, en parte a través de la degradación de la proteína GKAP42, y promueve la osteoclastogénesis, contribuyendo a la reabsorción ósea.
• A nivel subcellular, el TNF-α se localiza en la membrana celular, en membranas intracelulares y se secreta. La forma del dominio intracelular de TNF (ICD) también puede inducir la producción de IL12 en células dendríticas.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen la formación de enlaces disulfuro, la glicosilación, la miristoilación y la fosforilación, que son críticas para su estabilidad y actividad.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno (aminoácidos 77-233) corresponde a la forma soluble madura del TNF-α, que carece del dominio transmembrana N-terminal. Este diseño puede favorecer la detección tanto de las formas secretadas como de los precursores intracelulares.
• El conjugado está optimizado para citometría de flujo; para la tinción intracelular, considere el uso de un protocolo de fijación/permeabilización validado para citoquinas. Incluya los controles de isotipo apropiados y confirme la tinción en muestras estimuladas frente a no estimuladas.
• Realice experimentos de titulación para determinar la concentración óptima de anticuerpo para su configuración experimental específica, ya que los índices de tinción pueden variar entre los tipos de células y los estados de activación.

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