Anticuerpo monoclonal de conejo anti-CD14 humano/macaco para citometría de flujo - P08571

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de CD14

• CD14 es una glicoproteína específica de células mieloides rica en leucina, también conocida como antígeno de diferenciación monocítica CD14 o antígeno My23.
• CD14 actúa como un correceptor clave para el lipopolisacárido bacteriano (LPS), mediando el reconocimiento y la respuesta inmune innata. Referencias relacionadas: PMID:1698311, PMID:23264655
• En conjunto con LBP, CD14 se une al LPS monomérico y lo entrega al complejo LY96/TLR4, activando así la NF-kappa-B y la secreción de citoquinas proinflamatorias a través de vías dependientes de MyD88, TIRAP y TRAF6. Referencias relacionadas: PMID:20133493, PMID:22265692, PMID:23264655, PMID:8612135
• Además, CD14 actúa como correceptor para los heterodímeros TLR2:TLR6 y TLR2:TLR1, reconociendo lipopéptidos diacilados y triacilados respectivamente, y activa la señalización dependiente de balsas lipídicas. Referencias relacionadas: PMID:16880211
• CD14 también se une al LDL electronegativo (LDL(-)) y media la liberación de citoquinas inducida por el LDL(-), lo que lo implica en la inflamación relacionada con la aterosclerosis. Referencias relacionadas: PMID:23880187
• A nivel proteico, CD14 se detecta fuertemente en la superficie de los monocitos y débilmente en los granulocitos; también se expresa en la mayoría de los macrófagos tisulares. Referencias relacionadas: PMID:1698311
• Subcelularmente, CD14 se localiza en la membrana celular, enriquecido en balsas de membrana, y también se encuentra en el aparato de Golgi; existe además una forma secretada.
• La proteína es una glicoproteína anclada a GPI con múltiples repeticiones ricas en leucina y enlaces disulfuro, características que son críticas para su función.

Guía experimental y consejos técnicos

• Para la tinción en citometría de flujo, realice una titulación del anticuerpo conjugado usando células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC) o leucocitos de macaco cangrejero para determinar la dilución óptima.
• Dado que CD14 es una proteína de membrana anclada a GPI, utilice un protocolo de tinción de superficie celular; evite la permeabilización a menos que tenga como objetivo una tinción intracelular, ya que esto puede alterar los complejos localizados en balsas lipídicas.
• Considere la cotinción con marcadores de monocitos/macrófagos (por ejemplo, CD16, CD163) y tintes de viabilidad para enlazar correctamente las poblaciones de monocitos.
• Verifique la reactividad cruzada en muestras de macaco cangrejero si va a realizar estudios en primates no humanos; la reactividad informada del anticuerpo con este primate permite la investigación traslacional.
• Dado que CD14 se puede desprender en su forma soluble, evite pasos de lavado excesivos que puedan eliminar el anticuerpo unido de forma laxa; utilice tampón BSA/PBS al 0,5% para la tinción.
• Para el análisis de datos, utilice controles de compensación adecuados cuando use , y realice el enlace por FSC/SSC para identificar las poblaciones de monocitos/macrófagos.

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