Anticuerpo monoclonal de conejo anti-CD23 de ratón conjugado con para citometría de flujo - P20693

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización del CD23

• El CD23, también conocido como Fc-épsilon-RII o receptor Fc de inmunoglobulina épsilon de baja afinidad, es una proteína transmembrana de tipo II que actúa como receptor para la IgE y el CR2/CD21. Existe en dos isoformas (CD23a y CD23b) generadas por empalme alternativo, que difieren en sus dominios citoplasmáticos.
• En las células B, el CD23 es un regulador clave de la síntesis de IgE y la diferenciación de células B. Media la captura de antígenos dependiente de IgE y su posterior presentación a las células T, influyendo así en la inmunidad humoral.
• En los macrófagos, la unión de IgE y el entrecruzamiento de antígenos a través del CD23 desencadena la muerte intracelular de parásitos mediante la activación de la vía L-arginina-óxido nítrico.
• El CD23 se localiza principalmente en la membrana celular, pero también puede liberarse como receptor soluble por escisión proteolítica, actuando como una molécula secretada que modula aún más las respuestas inmunitarias.
• La proteína sufre modificaciones postraduccionales que incluyen glicosilación ligada a N, palmitoilación y formación de enlaces disulfuro. También contiene un dominio de lectina tipo C y un sitio de unión al calcio.
• Como indican las palabras clave de UniProt, el CD23 es una lipoproteína, proteoglicano y proteína de unión a IgE, lo que destaca sus diversos roles bioquímicos y su asociación con la membrana.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno utilizado para este anticuerpo fue una proteína de fusión recombinante que cubre los aminoácidos 50-331 del CD23 de ratón. Esta región abarca el dominio de lectina extracelular, lo que garantiza el reconocimiento específico de la proteína nativa.
• El anticuerpo está conjugado directamente con , un fluoróforo rojo lejano compatible con instrumentos comunes de citometría de flujo. Su perfil de excitación/emisión (∼686/713 nm) permite una buena separación de otros colorantes comunes como FITC, PE o APC.
• Para citometría de flujo, considere probar el anticuerpo en un rango de diluciones (por ejemplo, 0,5–5 µg/mL) en esplenocitos de ratón o leucocitos de sangre periférica, donde el CD23 se expresa en células B y algunas células mieloides.
• Incluya controles de isotipo apropiados y pasos de bloqueo del receptor Fc para minimizar la unión inespecífica, especialmente en muestras con alta expresión de FcγR.
• Dado que el peso molecular predicho es de ~37 kDa (no glicosilado) pero la glicoproteína madura migra a ~45–50 kDa en SDS-PAGE, este anticuerpo puede no ser adecuado para western blot a menos que se optimicen cuidadosamente las condiciones reducidas/desnaturalizadas. Su aplicación reportada es específicamente citometría de flujo.
• Valide la tinción en su cepa de ratón específica y el subconjunto celular de interés, ya que los niveles de expresión de CD23 pueden variar según el estado de activación y el microambiente.

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