Anticuerpo monoclonal conejo anti-ratón CD45 para IF/ICC y FC - P06800

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de CD45

• CD45 (PTPRC) es una proteína tirosina fosfatasa de tipo receptor esencial para la activación de células T a través del receptor de antígeno, actuando como regulador positivo de la coactivación de células T tras la unión a DPP4.
• La proteína contiene dos dominios fosfatasas: el primero tiene actividad enzimática intrínseca, mientras que el segundo influye en la especificidad de sustrato del primero.
• El empalme alternativo genera múltiples isoformas, incluyendo B220, un marcador bien conocido para células B y ciertos subconjuntos de células T activadas.
• CD45 se localiza predominantemente en la membrana celular, enriquecida en balsas de membrana y en la sinapsis inmunológica, donde modula la señalización.
• Tras la activación del receptor de células T, CD45 recluta y desfosforila efectores posteriores como SKAP1 y FYN, y modula la actividad de LYN.
• La interacción con CLEC10A en células dendríticas inmaduras en el sitio de contacto con la célula T reconoce el CD45 que porta el antígeno Tn, ayudando a afinar los umbrales de activación de células T y limitar la autoreactividad.
• La proteína está extensamente glicosilada y fosforilada, y se clasifica como una proteína de membrana de paso único tipo I con un péptido señal, regiones de repetición en tándem y una hélice transmembrana.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca el dominio extracelular (aminoácidos 26–566) del CD45 de ratón, cubriendo la región donde ocurre el empalme alternativo específico de isoforma; por lo tanto, el anticuerpo puede reconocer múltiples isoformas de CD45.
• Para citometría de flujo, considere titular el anticuerpo en una población celular relevante (por ejemplo, esplenocitos de ratón) para determinar la relación señal-ruido óptima. Utilice controles apropiados (control isotipo, fluorescencia menos uno) para delimitar con precisión los leucocitos CD45-positivos.
• En inmunofluorescencia (IF/ICC), la permeabilización puede no ser necesaria para la tinción superficial de CD45, pero las condiciones de fijación y permeabilización deben optimizarse para la cotinción con marcadores intracelulares. Utilice un conjunto de filtros compatible con el rojo lejano (por ejemplo, línea láser de 647 nm) para la detección.
• Aunque está validado para IF/ICC y FC, el anticuerpo puede ser adecuado para otras aplicaciones; sin embargo, los usuarios finales deben validar el rendimiento en su sistema de ensayo específico con el tipo de muestra relevante.

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