Anticuerpo monoclonal de conejo anti-ratón CD45 para IF/ICC, FC - P06800

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización del CD45

• El CD45, también conocido como antígeno común de leucocitos (L-CA) y Ly-5, es una fosfatasa de tirosina proteica de tipo receptor expresada en la superficie de todas las células hematopoyéticas nucleadas.
• Desempeña un papel crítico en la activación de las células T al desfosforilar moléculas de señalización clave como SKAP1, FYN y LYN, modulando así los umbrales de señalización descendente.
• A través de su interacción con DPP4, el CD45 actúa como un regulador positivo de la coactivación de las células T, mejorando la señalización del receptor de antígenos.
• En la sinapsis inmunológica, el CD45 interactúa con CLEC10A en las células dendríticas, reconociendo el CD45 modificado con antígeno Tn en las células T efectoras para ajustar finamente la activación y limitar la autoinmunidad.
• La proteína contiene dos dominios de fosfatasa intracelulares en tándem; el primer dominio posee actividad catalítica, mientras que el segundo influye en la especificidad del sustrato.
• El empalme alternativo genera múltiples isoformas, incluida B220 (CD45R), que se expresan diferencialmente entre los subconjuntos de leucocitos, permitiendo una regulación funcional diversa.
• El CD45 se localiza en la membrana celular, las balsas de membrana y la sinapsis inmunológica, lo cual es consistente con su función en el inicio de la señal y la modulación del correceptor.
• Modificaciones postraduccionales extensas, incluida la glicosilación N-ligada y la fosforilación, regulan su estabilidad, unión a ligandos y actividad de fosfatasa.

Guía experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo se genera contra una proteína recombinante que abarca los aminoácidos 26–566 del CD45 de ratón, abarcando todo el dominio extracelular. Se espera que reconozca un epítopo extracelular, lo que lo hace adecuado para la tinción de células vivas en citometría de flujo sin permeabilización.
• Para inmunofluorescencia, se puede utilizar una fijación estándar (por ejemplo, 4% PFA) y una permeabilización opcional. Se debe observar la tinción de la membrana debido a la topología de transmembrana del CD45.
• Como conjugado directo , no se requiere un anticuerpo secundario. Los títulos óptimos deben determinarse empíricamente para cada sistema experimental para lograr una tinción específica con un fondo mínimo.
• Dado la alta expresión de CD45 en los leucocitos, este anticuerpo es ideal para identificar y clasificar poblaciones de células inmunitarias en citometría de flujo. Incluya los controles apropiados de isotipo y de fluorescencia menos uno (FMO).

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