mAb de conejo anti-CD68 de ratón para IF/ICC y FC - P31996

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de CD68

• CD68, también conocida como macrosialina, Lamp4, gp110 o Scard1, es una proteína transmembrana altamente glicosilada perteneciente a la familia de glicoproteínas de membrana asociadas a lisosomas/endosomas (LAMP).
• Se expresa predominantemente en macrófagos tisulares y, en menor medida, en células dendríticas, por lo que sirve como marcador clásico de estos tipos celulares fagocíticos.
• CD68 desempeña un papel en las actividades fagocíticas, participando en el metabolismo lisosomal intracelular y mediando las interacciones extracelulares célula-célula y célula-patógeno.
• La proteína se une a lectinas o selectinas específicas de tejidos y órganos, facilitando el direccionamiento de subpoblaciones de macrófagos hacia sitios específicos del organismo.
• CD68 se recicla rápidamente entre los endosomas, los lisosomas y la membrana plasmática, un proceso que puede permitir a los macrófagos desplazarse sobre sustratos portadores de selectinas u otras células.
• A nivel subcelular, CD68 se localiza en las membranas de los endosomas, las membranas de los lisosomas y la membrana celular, en consonancia con su tráfico dinámico y sus funciones.
• La proteína contiene un péptido señal, un gran dominio luminal/extracelular con repeticiones similares a mucina, una única hélice transmembrana y una cola citoplasmática corta; además, está sujeta a corte y empalme alternativo y a la formación de enlaces disulfuro.

Orientación experimental y consejos técnicos

• Para inmunofluorescencia (IF/ICC), considere incluir un paso de permeabilización (por ejemplo, con Triton X-100 o saponina) para detectar las reservas intracelulares de CD68 en lisosomas/endosomas, ya que la proteína reside en estos compartimentos.
• Para citometría de flujo (FC), pruebe protocolos con células vivas y con células fijadas/permeabilizadas para detectar tanto la expresión de CD68 localizada en la superficie como la expresión total. Titule el anticuerpo para determinar la concentración óptima de tinción para su tipo celular específico y sus condiciones experimentales.
• Utilice controles de isotipo apropiados y controles de fluorescencia menos uno (FMO) para confirmar la especificidad de la tinción, especialmente al analizar poblaciones de macrófagos y células dendríticas.
• Dado que el inmunógeno abarca los aminoácidos 21–291 de CD68 de ratón (cubriendo el dominio extracelular/luminal), se espera que el anticuerpo reconozca la proteína nativa tanto en condiciones desnaturalizantes como nativas; no obstante, confirme su rendimiento en su aplicación específica mediante experimentos piloto.

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