Anticuerpo Monoclonal de Conejo contra SARS-CoV-2 Spike S1 para WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de SARS-CoV-2 Spike S1

• La glucoproteína Spike (S) media la entrada viral al unirse al receptor de la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2) del huésped, un paso clave para iniciar la infección. Referencias relacionadas: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Receptores alternativos como la neuropilina-1 (NRP1)/NRP2, el receptor de asialoglicoproteína 1 (ASGR1) y las integrinas también pueden facilitar la entrada del virus, lo que puede contribuir al tropismo por las células epiteliales olfativas que expresan niveles bajos de ACE2. Referencias relacionadas: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• La proteína S es escindida por proteasas del huésped en las subunidades S1 (unión al receptor) y S2 (fusión de membrana); la escisión en el sitio S2' por TMPRSS2 o catepsina L es esencial para la activación de la fusión. Referencias relacionadas: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• Tras la escisión, la subunidad S2 sufre una reorganización conformacional dramática desde un estado de pre-fusión hasta un horquilla trímera de post-fusión, acercando las membranas virales y celulares para la fusión.
• A nivel subcelular, la proteína spike se localiza en la membrana del virión, en la membrana del compartimiento intermedio entre el retículo endoplásmico y el aparato de Golgi (ERGIC) del huésped y en la membrana de la célula huésped, reflejando su ciclo de tráfico y gemación.
• La proteína S posee propiedades tipo superantígeno y participa en la inmunoevasión viral, inhibiendo las respuestas inmunes innatas del huésped y contrarrestando factores de restricción como la tetherina.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Diseño del inmunógeno: El anticuerpo se generó contra un péptido sintético que abarca los aminoácidos 200-300 dentro de la subunidad S1 (YP_009724390.1), una región que se superpone al dominio de unión al receptor. Este epítopo se conserva en muchos aislamientos de SARS-CoV-2, lo que sugiere una amplia reactividad.
• Para Western blot (WB), la proteína spike de longitud completa tiene un peso molecular predicho de ~141 kDa; sin embargo, puede producirse la detección de productos de escisión de S1 (aproximadamente 80 kDa) dependiendo de la preparación de la muestra. Valide usando lisados de células infectadas con SARS-CoV-2 o proteína S1 recombinante.
• En inmunofluorescencia (IF/ICC), considere protocolos de permeabilización para detectar la proteína spike intracelular en células infectadas. La tinción simultánea con marcadores de orgánulos puede ayudar a estudiar la localización subcelular.
• Para aplicaciones de ELISA, el anticuerpo puede usarse como reactivo de captura o detección para la proteína S1 recombinante o la cuantificación de partículas virales. El título y la reactividad cruzada deben confirmarse frente a variantes relevantes de SARS-CoV-2.
• Como con todos los anticuerpos de investigación, las diluciones de trabajo óptimas deben determinarse empíricamente para cada ensayo y tipo de muestra.

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