Anticuerpo monoclonal de conejo contra Smad5 para WB, IP, ELISA - Q99717

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Smad5

• SMAD5 (homólogo 5 de Mothers against decapentaplegic), también conocido como JV5-1 o MADH5, es un miembro de la familia de factores de transcripción SMAD que transducen señales de los ligandos de la superfamilia TGF-β.
• Tras la estimulación por proteínas morfogenéticas óseas (BMP), SMAD5 se fosforila por los receptores de tipo I de BMP, lo que induce su asociación con SMAD4. El complejo resultante se transloca al núcleo y se une a los elementos de unión a Smad (SBE) para regular la expresión génica. Referencias relacionadas: PMID:9442019 PMID:33510867
• SMAD5 es esencial para el desarrollo embrionario, la diferenciación celular, la angiogénesis y la homeostasis tisular. Referencias relacionadas: PMID:12064918 PMID:16516194
• En su estado no fosforilado, SMAD5 ejerce una función citoplasmática en el metabolismo energético al potenciar la respiración mitocondrial y la glicólisis mediante una interacción con la hexoquinasa 1 (HK1). Referencias relacionadas: PMID:28675158
• Estudios de localización subcelular revelan SMAD5 en el citoplasma, el núcleo y la mitocondria, lo que refleja sus diversas funciones de señalización y metabólicas.
• SMAD5 se expresa de forma ubicua en todos los tejidos humanos.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen fosforilación y acetilación; también contiene un dominio de unión a zinc característico de las proteínas SMAD.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno fue un péptido sintético correspondiente a los aminoácidos 200–300 de SMAD5 humano. Se espera que el anticuerpo monoclonal de conejo obtenido reconozca la proteína SMAD5 total; es posible que no distinga entre las formas fosforilada y no fosforilada, a menos que el fosfoepítopo se encuentre dentro de esta región.
• Para Western blot, se espera una banda de aproximadamente 52 kDa. Se recomienda tratar las células con ligandos BMP (por ejemplo, BMP2/BMP4) para visualizar los desplazamientos de SMAD5 fosforilado o verificar la activación de la vía.
• Este anticuerpo es adecuado para la inmunoprecipitación de SMAD5 endógeno a partir de lisados de células humanas y de ratón; recomendamos optimizar las condiciones de lisis y lavado para estudios de coinmunoprecipitación.
• En ELISA, el anticuerpo se puede usar para la detección de Smad5 en formatos de ELISA basados en péptidos o sándwich. Valide los resultados con proteína Smad5 recombinante o lisados celulares.
• Como ocurre con cualquier anticuerpo, valide la especificidad en su sistema experimental usando controles positivos (por ejemplo, HeLa tratada con BMP, HEK293) y negativos (por ejemplo, silenciamiento mediado por ARNi) adecuados.

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