pAb de conejo para Histona H3-R8 dimetilada simétrica (Q16695/P68431) para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA, ChIP-seq

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Histona H3.1t / Histona H3.1

Las variantes de la histona H3 (incluyendo H3.1t codificada por H3-4/HIST3H3 y H3.1 codificada por múltiples grupos de genes como H3C1-H3C12) son componentes centrales del nucleosoma. Los nucleosomas envuelven y compactan el ADN en cromatina, limitan la accesibilidad al ADN y desempeñan un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica.

Referencias relacionadas: UniProt P68431

• Estas histonas están sujetas a un conjunto complejo de modificaciones postraduccionales (MPT), denominado colectivamente código de histonas, que regula la dinámica de la cromatina y la expresión génica. Entre ellas, la dimetilación simétrica de la arginina en la posición 8 (R8) de la histona H3 madura (correspondiente a Arg9 en la secuencia de UniProt) es catalizada por la proteína arginina metiltransferasa 5 (PRMT5). Esta modificación está asociada a la represión transcripcional y la formación de heterocromatina.

Referencias relacionadas: UniProt Q16695

• La histona H3.1t (UniProt Q16695) es una variante específica de testículo expresada principalmente en células testiculares, mientras que H3.1 (UniProt P68431) representa las formas canónicas somáticas.
• Localización subcelular: Ambas variantes se localizan en el núcleo y los cromosomas.

Guía experimental y consejos técnicos

• Western Blot (WB): Se espera una banda de aproximadamente 15 kDa. Utilice controles positivos y negativos apropiados (por ejemplo, células sin tratar frente a células tratadas con inhibidor de PRMT5) para confirmar la especificidad por la dimetilación simétrica. Considere realizar ensayos de competición con péptidos para validar la unión del anticuerpo al epitopo R8me2s.
• Inmunohistoquímica (IHC-P) e Inmunofluorescencia (IF/ICC): Optimice los pasos de fijación y permeabilización, ya que la accesibilidad al epitopo puede variar. Dado que la histona H3 se encuentra en el núcleo, asegure un patrón de tinción nuclear y compárelo con la tinción de histona H3 total o con la contratinción con DAPI.
• ELISA: Este anticuerpo se puede utilizar en ELISA directo o indirecto para cuantificar los niveles de dimetilación simétrica. Titule la concentración del anticuerpo e incluya agentes bloqueantes apropiados.
• ChIP-seq: Debido a la alta abundancia de la histona H3, optimice la reticulación y la fragmentación de la cromatina. Utilice una cantidad mínima de material de entrada y valide la eficiencia del ChIP con loci genómicos positivos y negativos (por ejemplo, regiones heterocromáticas frente a regiones eucromáticas).
• Consejo general: Incluya siempre un control de péptido no modificado para distinguir la señal específica de la modificación.

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