Anticuerpo policlonal de conejo para Symmetric DiMethyl-Histona H4-R3 (P62805) para WB, IHC, IF/ICC, ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la histona H4

• La histona H4 es una de las histonas centrales que forman el nucleosoma, la unidad fundamental de la cromatina. Junto con las histonas H2A, H2B y H3, un octámero de histonas envuelve aproximadamente 147 pb de ADN, lo compacta y regula el acceso al material genético.
• Este empaquetamiento es esencial para los procesos dependientes de la plantilla de ADN, que incluyen la transcripción, replicación, reparación y el mantenimiento de la estabilidad cromosómica. La regulación dinámica de la estructura de la cromatina se rige por modificaciones postraduccionales (MPT) en las histonas, a menudo denominado el "código de histonas".
• La histona H4 se localiza principalmente en el núcleo y está asociada a los cromosomas. Puede localizarse en el núcleo cuando se producen modificaciones específicas, por ejemplo, acetilación durante la espermatogénesis.
• La H4 sufre una gran variedad de MPT, que incluyen acetilación, metilación, fosforilación, citrulinación y diversas acilaciones. Estas modificaciones ocurren en múltiples residuos y regulan eventos posteriores distintos.
• La dimetilación simétrica de la arginina 3 (H4R3me2s) es catalizada por las proteína arginina metiltransferasas PRMT5 y PRMT7. Esta modificación está implicada en la regulación transcripcional y es una de las muchas marcas que componen el código de histonas. Referencias relacionadas: UniProt P62805.

Guía experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo se generó contra un péptido sintético que abarca los aminoácidos 1-100 de la histona H4 humana (NP_003529.1), con dimetilación simétrica en el Arg3. El diseño del inmunógeno sugiere especificidad para la forma modificada, pero debe evaluarse la reactividad cruzada con formas no modificadas o con otras formas modificadas.
• Para transferencia Western (WB), el peso molecular predicho de la histona H4 es de ~11 kDa. Considere usar extractos nucleares o preparaciones enriquecidas en histonas como controles positivos. Reduzca y desnaturalice las muestras antes de cargarlas.
• En inmunohistoquímica (IHC) e inmunofluorescencia (IF/ICC), puede ser necesaria la recuperación de antígeno para exponer el epítopo, especialmente en tejidos fijados con formalina y embebidos en parafina. Pruebe múltiples métodos de recuperación de antígeno.
• Valide la especificidad del anticuerpo incluyendo controles adecuados, como ensayos de competición con péptidos o la comparación con células tratadas con inhibidores de metiltransferasas.
• Se predice que el anticuerpo reacciona con un amplio rango de especies debido a la alta conservación de la secuencia de la histona H4; sin embargo, verifique la reactividad en su sistema modelo específico.
• Optimice los factores de dilución de forma empírica para cada aplicación; las diluciones iniciales típicas se pueden adaptar a partir de protocolos existentes para anticuerpos policlonales dirigidos a modificaciones de histonas.

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