Anticuerpo Policlonal de Conejo TriMetil-Histona H3-K14 (Q16695 / P68431) para WB, IF, ELISA

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H3

La histona H3 es un componente central del nucleosoma, la unidad fundamental de la cromatina. Junto con H2A, H2B y H4, forma el núcleo histónico octamérico alrededor del cual se envuelve el ADN, compactando el genoma y regulando la accesibilidad del ADN. Este papel estructural es central para procesos como la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. La función de la histona H3 se controla dinámicamente mediante una compleja serie de modificaciones postraduccionales (PTM), incluyendo acetilación, metilación, fosforilación y otras, denominadas colectivamente el "código de histonas". Estas modificaciones alteran la estructura de la cromatina y sirven como plataformas de unión para proteínas efectoras.

La histona H3 se localiza principalmente en el núcleo y se distribuye a lo largo de los cromosomas. Existen diferentes variantes de H3: la H3.1 y H3.2 canónicas, la H3.3 independiente de la replicación y la H3.1t específica de testículo (codificada por H3-4/HIST3H3). Según UniProt, la variante H3.1t (Q16695) se expresa específicamente en células testiculares, mientras que la H3.1 principal (P68431) es ubicua. Ambas isoformas comparten un alto grado de identidad de secuencia y sufren PTM similares.

El residuo K14 de la histona H3 es un sitio conocido de múltiples PTM, incluyendo acetilación (H3K14ac) y metilación. La trimetilación de H3K14 (H3K14me3) es una modificación reconocida recientemente que puede desempeñar papeles en la regulación de la cromatina y la expresión génica. Este anticuerpo se generó contra un péptido sintético que abarca la cola N-terminal (aa1-100), la región que sobresale del nucleosoma y está más fuertemente modificada. Se espera que detecte específicamente la forma trimetilada de K14.

Referencias relacionadas: UniProt Q16695 UniProt P68431

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde a la cola N-terminal (aa 1-100) de la histona H3 humana. Esta región es muy conservada, lo que explica la amplia reactividad cruzada prevista. Sin embargo, dado que este anticuerpo está dirigido a una PTM específica (K14 trimetil), se recomienda la validación en el sistema celular o tisular de interés para confirmar la reactividad y especificidad.
• Para la transferencia Western (Western blotting), las histonas están fuertemente unidas al ADN nuclear; por lo tanto, la extracción ácida o los protocolos de enriquecimiento de histonas pueden mejorar la detección. Utilice controles de carga apropiados (p. ej., H3 total o H4) para normalizar las diferencias de carga.
• Para inmunofluorescencia/ICC, la fijación con paraformaldehído seguida de permeabilización con Triton X-100 suele ser efectiva para objetivos nucleares. Sin embargo, el epítopo puede ser sensible a la sobre-fijación; optimice el tiempo de fijación y la concentración de detergente.
• Dado que los anticuerpos específicos de PTM pueden exhibir cierta reactividad cruzada con otras modificaciones, considere utilizar ensayos de competencia con péptidos (p. ej., preincubar el anticuerpo con péptido K14 trimetil frente a péptidos no modificados o mono/di-metilados) para verificar la especificidad bajo sus condiciones experimentales.
• ELISA se enumra como una aplicación; para el recubrimiento, se pueden usar péptidos de histona o nucleosomas purificados. Asegúrese de que el recubrimiento cubra adecuadamente el epítopo K14me3.

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