Anticuerpo monoclonal de ratón contra TriMetil-Histona H3-K27 (P68431) para ChIP, CUT&Tag, WB e IHC

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la histona H3.1

• La histona H3.1 es un componente central del nucleosoma, la unidad repetitiva básica de la cromatina. Los nucleosomas envuelven y compactan el ADN, regulando el acceso a la información genética.
• Como histona clave, H3 desempeña papeles centrales en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. La accesibilidad del ADN está controlada por un conjunto complejo de modificaciones postraduccionales (MPT), denominado colectivamente el "código de histonas", que también implica la remodelación de nucleosomas.
• La cola N-terminal de la histona H3 está sujeta a una gran variedad de MPT, entre las que se incluyen la metilación, acetilación, fosforilación, citrulinación y otras. Estas marcas son dinámicas y orquestan diversos procesos basados en la cromatina.
• La trimetilación de la lisina 27 (H3K27me3) es una marca represora bien caracterizada asociada al silenciamiento génico y la formación de heterocromatina, depositada principalmente por el complejo represor Polycomb 2 (PRC2).
• Subcelularmente, la histona H3.1 se localiza en el núcleo y se asocia a los cromosomas.

Referencias relacionadas: UniProt P68431

Orientación experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo se obtuvo contra un péptido trimetilado sintético que abarca los residuos alrededor de K27. Se espera que reconozca específicamente la forma trimetilada de la histona H3 en la lisina 27 y que no presente reacción cruzada con estados no modificados u otros estados metilados. Considere validar la especificidad con ensayos de competición por péptido o controles positivos/negativos apropiados.
• Para el análisis por Western blot, la extracción de histonas mediante protocolos de extracción ácida suele mejorar la señal y reducir el fondo. Utilice un control de carga como la histona H3 total o la histona H4.
• Para inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y CUT&Tag, optimice la concentración del anticuerpo y las condiciones de reticulación. La alta especificidad por H3K27me3 lo hace adecuado para mapear esta marca represora en todo el genoma.
• En inmunohistoquímica (IHC-P), puede ser necesario un proceso de recuperación de antígeno (por ejemplo, recuperación de epitopo inducida por calor) para exponer el epitopo. Valide el patrón de tinción en el tejido y tipo celular correspondiente.
• Para inmunofluorescencia (IF/ICC), las condiciones de fijación y permeabilización deben elegirse cuidadosamente para preservar la arquitectura de la cromatina y la accesibilidad del epitopo.
• Aunque este anticuerpo se suministra para múltiples aplicaciones, realice siempre pruebas piloto de diluciones y condiciones en su sistema experimental específico para garantizar un rendimiento óptimo.

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