Anticuerpo monoclonal de conejo TriMetil-Histona H3-K27 (Q16695/P68431) para aplicaciones de WB, ChIP y CUT&Tag

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la Histona H3

La histona H3 es una proteína histona central que, junto con H2A, H2B y H4, forma el nucleosoma, la unidad repetitiva fundamental de la cromatina. Los nucleosomas envuelven y compactan el ADN, controlando así la accesibilidad de la información genética a las maquinarias celulares responsables de la transcripción, replicación y reparación. Este papel central convierte a las histonas en reguladores clave de la estabilidad genómica y la expresión génica.

La versatilidad funcional de las histonas está mediada en gran medida por una diversa gama de modificaciones postraduccionales (MPT), denominadas colectivamente "código de histonas". Estas modificaciones, que incluyen acetilación, metilación, fosforilación y otras, ocurren en residuos específicos y regulan la dinámica de la cromatina. Entre ellas, la tri-metilación de la histona H3 en la lisina 27 (H3K27me3) es una marca represiva bien establecida asociada con la formación de heterocromatina facultativa y el silenciamiento génico a largo plazo.

Este anticuerpo monoclonal de conejo se generó contra un péptido sintético tri-metilado que abarca la K27 de la histona H3 humana (basado en NP_003520.1). Reconoce específicamente la histona H3 solo cuando está tri-metilada en K27, permitiendo la detección precisa de esta marca epigenética en diversos ensayos.

Referencias relacionadas: PMID:16267050, PMID:17194708

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético tri-metilado alrededor de la K27; por lo tanto, se espera que este anticuerpo tenga una alta especificidad para el estado tri-metilado. Considere verificar la especificidad mediante ensayos de dot blot o competición con péptidos utilizando péptidos no modificados, mono-, di- y tri-metilados.
• Para Western blot (WB), se recomiendan extractos nucleares ricos en histonas o histonas extraídas con ácido. La banda predicha es de ~15 kDa. Utilice controles de carga apropiados (por ejemplo, anticuerpo contra H3 total o el extremo C-terminal de la histona H3) para normalizar la carga de proteína.
• En inmunoprecipitación de cromatina (ChIP), este anticuerpo se puede utilizar para enriquecer regiones de cromatina marcadas con H3K27me3. Optimice la fragmentación de la cromatina y la concentración de anticuerpo para cada tipo celular. Incluya regiones de control positivas (por ejemplo, loci de genes HOX) y negativas (por ejemplo, promotores de genes housekeeping) en el análisis por qPCR.
• Para CUT&Tag (Cleavage Under Targets & Tagmentation), el anticuerpo puede servir como anticuerpo primario para la focalización y el corte in situ. Siga el protocolo del fabricante para los enfoques basados en perlas o de unión directa. El análisis a nivel del genoma puede revelar la distribución de H3K27me3 en todo el genoma.
• En inmunofluorescencia (IF/ICC) e inmunohistoquímica (IHC-P), se espera una tinción nuclear. Optimice las condiciones de fijación (por ejemplo, PFA al 4% para IF, secciones incluidas en parafina fijadas con formalina para IHC) y permeabilización. El bloqueo con suero/BSA puede minimizar el fondo.
• Valide siempre el anticuerpo en el sistema de muestra relevante y en el contexto de aplicación correspondiente. Titular el anticuerpo e incluir los controles apropiados para garantizar resultados reproducibles.

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