Anticuerpo policlonal de conejo TriMetil-Histona H3-K4 (H3K4me3) – Q16695/P68431 para ChIP-seq y WB

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H3

La histona H3 es una proteína histona central que, junto con H2A, H2B y H4, se ensambla en el nucleosoma, la unidad repetitiva fundamental de la cromatina. Los nucleosomas compactan el ADN y regulan su accesibilidad a la maquinaria celular, desempeñando un papel central en la transcripción, replicación, reparación y estabilidad cromosómica. Las modificaciones postraduccionales de las histonas, conocidas colectivamente como el "código de histonas", controlan dinámicamente la estructura de la cromatina y la expresión génica. Referencias relacionadas: UniProt Q16695/P68431

La trimetilación de la lisina 4 en la histona H3 (H3K4me3) es un sello distintivo de los promotores génicos activos y está íntimamente ligada a la iniciación y elongación transcripcional. Esta modificación es depositada por metiltransferasas específicas y eliminada por desmetilasas, sirviendo como un regulador epigenético crítico en el desarrollo, la diferenciación y la enfermedad.

La histona H3 se localiza en el núcleo y está asociada con los cromosomas. Existen múltiples variantes, incluidas la canónica H3.1 (codificada por varios genes, representada por P68431) y la H3.1t específica de testículo (Q16695). Mientras que H3.1 se expresa de forma ubicua, H3.1t se encuentra predominantemente en células testiculares. Referencias relacionadas: UniProt Q16695

Las colas N‑terminales de las histonas están sujetas a una amplia gama de modificaciones (acetilación, metilación, fosforilación y muchas más) que generan un paisaje regulatorio complejo. Estudios de mapeo integral han catalogado estas modificaciones, subrayando la intrincada naturaleza combinatoria del código de histonas. Referencias relacionadas: PMID:17194708

Orientación Experimental y Consejos Técnicos

• Para Western blot (WB) y dot blot (DB), se espera una sola banda de aproximadamente 15 kDa. Se recomiendan lisados ricos en histonas (por ejemplo, proteínas nucleares de HeLa extraídas con ácido) como controles positivos, y la carga debe normalizarse con respecto a H3 total.
• En inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y ChIP‑seq, optimice las condiciones de reticulación y sonicación para el tipo celular específico. Incluya loci positivos conocidos para H3K4me3 (por ejemplo, el promotor de GAPDH) y regiones de control negativo para validar el enriquecimiento.
• Para inmunohistoquímica en secciones incluidas en parafina (IHC‑P), la recuperación antigénica (por ejemplo, con tampón citrato, pH 6.0) es esencial. Debe observarse un patrón de tinción predominantemente nuclear, con una intensidad de señal que refleje la actividad transcripcional del tejido.
• En ELISA y otros ensayos basados en placa, considere usar un péptido H3K4 trimetilado como control positivo y un péptido no modificado o monometilado para confirmar la especificidad de la modificación.
• Como con cualquier anticuerpo policlonal, la consistencia entre lotes debe verificarse mediante titulación en muestras positivas conocidas. Se predice reactividad cruzada con otras especies basándose en la alta conservación de secuencia en vertebrados, pero se recomienda validar en el sistema de muestra relevante.

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