Anticuerpo monoclonal de conejo TriMetil-Histona H3-K4 (Q16695 / P68431) para investigación epigenética y ChIP, WB, ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la Histona H3

• La Histona H3 es un componente central del nucleosoma, que envuelve y compacta el ADN en cromatina para restringir la accesibilidad a la maquinaria transcripcional, de reparación y replicación. Desempeña un papel central en el mantenimiento de la estabilidad cromosómica y la regulación de la expresión génica a través de una compleja gama de modificaciones postraduccionales (el "código de histonas"). Referencias relacionadas: PMID:17194708
• La proteína H3.1 canónica (codificada por múltiples genes HIST1H3, SWISS P68431) se expresa de manera dependiente de la replicación en la mayoría de los tipos celulares, mientras que la variante específica de testículo H3.1t (HIST3H3, SWISS Q16695) se expresa predominantemente en células testiculares. Ambas se localizan en el núcleo y se asocian con los cromosomas durante la división celular. Referencias relacionadas: Gen/Proteína específica; ver UniProt Q16695/P68431
• La trimetilación en la lisina 4 (H3K4me3) es una marca epigenética fundamental asociada con promotores activos, conformación de cromatina abierta e inicio transcripcional. Es depositada por metiltransferasas de la familia COMPASS y reconocida por proteínas lectoras que facilitan la activación génica. Referencias relacionadas: PMID:16185088
• H3K4me3 coexiste e interactúa con otras modificaciones de histonas (p. ej., acetilación, fosforilación, metilación en otros residuos) para afinar los estados de la cromatina. La desregulación de esta marca se ha relacionado con cáncer, trastornos del desarrollo y disfunción inmunológica, lo que la convierte en un biomarcador clave en la investigación epigenética y el desarrollo de IVD.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno (un péptido sintético trimetilado alrededor de la K4) fue diseñado para conferir una alta especificidad para la modificación H3K4me3. Para confirmar la selectividad, considere ensayos de competición con péptidos o tratamiento con histona desmetilasas (p. ej., LSD1) que eliminan grupos metilo.
• Para Western blot (WB), se recomiendan protocolos de extracción de histonas que enriquezcan las proteínas nucleares básicas. La banda esperada es de ~15 kDa; verifique la identidad de la banda utilizando controles positivos de H3K4me3.
• En inmunoprecipitación de cromatina (ChIP), valide el enriquecimiento en genes diana conocidos de H3K4me3 (p. ej., promotor de GAPDH) mediante qPCR. Incluya controles de IgG apropiados para evaluar el fondo.
• Para inmunohistoquímica (IHC‑P) e inmunofluorescencia (IF/ICC), las condiciones de recuperación de antígeno (citrato pH 6 o EDTA pH 9) pueden influir en la tinción. Pruebe un rango de diluciones en tejidos positivos y negativos.
• Debido a la alta conservación de la secuencia entre especies, se espera reactividad cruzada con humano, ratón, rata y otros vertebrados. Valide la detección en su sistema de muestra específico antes del análisis cuantitativo.

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