Anticuerpo policlonal de conejo TriMetil-Histona H3-K64 (Q16695/P68431) (WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA)

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H3

La histona H3 es un componente central del nucleosoma, la unidad repetitiva fundamental de la cromatina. Los nucleosomas envuelven y compactan el ADN, regulando su accesibilidad a la maquinaria celular necesaria para procesos como la transcripción, reparación del ADN, replicación del ADN y el mantenimiento de la estabilidad cromosómica. Las histonas, por lo tanto, juegan un papel central en la organización y función del genoma. La accesibilidad del ADN se controla dinámicamente a través de un complejo conjunto de modificaciones postraduccionales (MPT) en las histonas, a menudo denominadas código de histonas, así como a través de actividades de remodelación de nucleosomas.

Dos isoformas están representadas por las referencias Swiss-Prot Q16695 y P68431. Q16695 (Histona H3.1t, también conocida como H3t o H3.4) es una variante de histona H3 específica de testículo expresada principalmente en células testiculares, donde probablemente contribuye a la reorganización de la cromatina durante la espermatogénesis. P68431 (Histona H3.1) es una histona canónica dependiente de replicación que se expresa ampliamente y se deposita en el ADN recién sintetizado durante la fase S. Ambas isoformas comparten una extensa homología de secuencia y están sujetas a una multitud de MPT, incluyendo metilación, acetilación, fosforilación y otras, que modulan la estructura y función de la cromatina.

La trimetilación de la lisina 64 (K64) es una marca epigenética específica dentro de la cola de la histona H3, aunque sus funciones biológicas precisas aún se están dilucidando. Al igual que otros eventos de metilación de histonas, se cree que influye en la expresión génica al servir como sitio de acoplamiento para proteínas efectoras o al alterar la compactación de la cromatina.

Referencias relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno utilizado es un péptido sintético trimetilado correspondiente a la región que rodea a la lisina 64 de la histona H3 (basado en NP_003520.1). Este diseño permite el reconocimiento específico del estado trimetilado en este residuo.
• Para Western blot (WB), considere usar lisados celulares totales de muestras de humano, ratón, rata u otros vertebrados. El peso molecular predicho de ~15 kDa debe confirmarse en condiciones reductoras y desnaturalizantes.
• Para inmunohistoquímica (IHC-P), pueden requerirse métodos de recuperación de antígeno (por ejemplo, recuperación de epítopo inducida por calor en tampón citrato) para desenmascarar el epítopo. Valide la tinción en tejidos control positivo y negativo, teniendo en cuenta la expresión específica de testículo de la isoforma H3.1t.
• En inmunofluorescencia (IF/ICC), las condiciones óptimas de fijación y permeabilización deben determinarse empíricamente. La amplia reactividad cruzada predicha hace que este anticuerpo sea adecuado para estudios comparativos multiespecie.
• Para ELISA, el anticuerpo se puede usar para detectar péptidos o proteínas recombinantes de H3-K64 trimetilada. Asegure pasos de bloqueo y lavado adecuados para minimizar la unión inespecífica.

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