Anticuerpo Policlonal de Conejo TriMetil-Histona H4-K20 para WB/IHC/IF (P62805)

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H4

La histona H4 es una de las histonas centrales que constituyen el nucleosoma, la unidad repetitiva fundamental de la cromatina. Junto con las histonas H2A, H2B y H3, forma un octámero alrededor del cual se enrollan aproximadamente 147 pares de bases de ADN, compactando el genoma en el núcleo y regulando la accesibilidad del ADN. La histona H4 desempeña un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. La modulación dinámica de la estructura de la cromatina se logra en gran medida a través de un conjunto complejo de modificaciones postraduccionales (PTM) en las colas de las histonas, denominadas colectivamente "código de histonas". Referencias relacionadas: UniProt P62805

La histona H4 se localiza principalmente en el núcleo y se asocia con los cromosomas. La H4 acetilada también se encuentra en el núcleo durante etapas específicas de la espermatogénesis (espermátidas en paso 11). Referencias relacionadas: UniProt P62805

El residuo de lisina 20 de la histona H4 (H4K20) está sujeto a múltiples estados de metilación, incluidas mono-, di- y trimetilación. La trimetilación de H4K20 (H4K20me3) es un sello distintivo de la heterocromatina constitutiva y está involucrada en el silenciamiento génico, la respuesta al daño del ADN y la regulación del ciclo celular. Esta modificación se regula dinámicamente mediante metiltransferasas (p. ej., SUV4-20H1/2) y desmetilasas. Se han identificado muchas otras PTM en H4 mediante espectrometría de masas y otras técnicas, lo que destaca la complejidad de la regulación de las histonas. Referencias relacionadas: PMID:12086618, PMID:15964846, PMID:17967882

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético correspondiente a la región trimetilada de K20 de la histona H4 humana. Se espera que este anticuerpo reconozca específicamente H4K20me3, pero la reactividad cruzada con otros estados de metilación de H4 o H4 no modificada debe descartarse experimentalmente mediante ensayos de competencia de péptidos apropiados o modelos de knockout/knockdown.
• Para la detección por Western blot (WB), se recomiendan extractos nucleares enriquecidos en histonas o histonas extraídas con ácido como tipo de muestra. Optimice la concentración del anticuerpo primario (p. ej., comience con 1:500–1:2000) y use un conjugado de anticuerpo secundario adecuado.
• En inmunohistoquímica (IHC-P), la recuperación de antígeno con tampón de citrato (pH 6,0) o tampón de EDTA (pH 8,0) puede mejorar la disponibilidad del epítopo; optimice el método de recuperación empíricamente.
• Para inmunofluorescencia (IF/ICC), se sugiere la permeabilización con 0,1–0,5% de Triton X-100 o digitonina. Las condiciones de fijación (p. ej., 4% de PFA) pueden afectar la accesibilidad del epítopo; pruebe diferentes protocolos.
• Al usar en ensayos ELISA o dot blot (DB), considere usar placas bloqueadas con BSA y un sistema de detección biotinilado para una mayor sensibilidad.
• Incluya siempre un control negativo (p. ej., péptido H4 no modificado o control IgG) y valide la especificidad del anticuerpo en el sistema de muestra relevante mediante espectrometría de masas u otros métodos ortogonales.
• El anticuerpo muestra una reactividad cruzada de rango amplio predicha (Humano, Ratón, Rata y otros), pero se aconseja la validación en cada especie de interés.

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