Ubiquitin Rabbit pAb - P0CG47

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la Ubiquitina

• Codificada por el gen UBB, la poliubiquitina-B se procesa en múltiples monómeros de ubiquitina que pueden conjugarse a proteínas diana.
• La unión covalente de ubiquitina (monoubiquitinación) o cadenas de poliubiquitina a las proteínas regula diversos procesos celulares. Los tipos de enlace de las cadenas de poliubiquitina determinan los resultados funcionales: las cadenas enlazadas a Lys-48 dirigen los sustratos a la degradación proteasómica; las cadenas enlazadas a Lys-63 participan en la endocitosis, las respuestas al daño del ADN y la señalización de NF-kappa-B; las cadenas lineales participan en la señalización celular.
• La conjugación de ubiquitina también puede producirse a través de otros enlaces (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33) con funciones en la reparación del ADN, la degradación asociada al RE, las respuestas al estrés y la modificación de quinasas.
• Las cadenas de poliubiquitina libres (no ancladas) funcionan de manera independiente en la activación de quinasas y la señalización intracelular.
• La proteína se localiza en el citoplasma, el núcleo y la membrana externa de la mitocondria.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen la fosforilación y la ADP-ribosilación, y forma enlaces isopeptídicos con las proteínas diana.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a la ubiquitina de longitud completa (1-228), por lo que el anticuerpo puede reconocer tanto la ubiquitina libre como los conjugados de ubiquitina. En el western blot, la ubiquitina libre se detecta a ~26kDa, mientras que las proteínas poliubiquitinadas aparecen como manchas de alto peso molecular.
• Para WB, considere tratar las células con un inhibidor del proteasoma (p. ej., MG132) para acumular especies poliubiquitinadas si está analizando la degradación.
• Valide la especificidad con los controles negativos adecuados, como el silenciamiento mediado por siRNA de la ubiquitina.
• Para IHC-P, puede ser necesaria la recuperación de antígenos; optimice la dilución del anticuerpo y las condiciones de detección utilizando tejidos positivos conocidos.
• Las aplicaciones de ELISA pueden beneficiarse de probar tanto el formato directo como el tipo sándwich, dependiendo del tipo de muestra.

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