Anticuerpo Policlonal de Conejo contra Ubiquitina para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P0CG47

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Ubiquitina

• La ubiquitina está codificada por el gen UBB y se produce como poliubiquitina-B, una proteína precursora que se procesa para producir monómeros de ubiquitina maduros. La ubiquitina es una proteína altamente conservada de 76 aminoácidos involucrada en la modificación postraduccional de proteínas diana.
• La ubiquitina existe unida covalentemente a otras proteínas o libre (no anclada). Cuando está unida covalentemente, se conjuga mediante un enlace isopeptídico a proteínas diana, formando monómeros (monoubiquitina) o cadenas de poliubiquitina unidas a través de diferentes residuos de Lis (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33, Lys-48, Lys-63) o cadenas lineales unidas a través de la Met iniciadora.
• Diferentes enlaces en las cadenas de poliubiquitina dictan distintos resultados celulares: las cadenas unidas por Lys-48 marcan proteínas para degradación proteasomal, mientras que las cadenas unidas por Lys-63 están involucradas en endocitosis, respuestas al daño del ADN y señalización de NF-kappa-B. Otros enlaces (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33) participan en reparación del ADN, ERAD, regulación del ciclo celular y modificación de quinasas.
• Además de las formas conjugadas, las cadenas de poliubiquitina libres no ancladas también tienen funciones de señalización, como activar proteína quinasas y modular otras vías de señalización.
• La ubiquitina se localiza en múltiples compartimentos subcelulares, incluidos el citoplasma, el núcleo y la membrana externa de la mitocondria, lo que refleja su amplia participación en procesos celulares.
• Las modificaciones postraduccionales de la propia ubiquitina incluyen fosforilación y ADP-ribosilación, que pueden modular su función. La proteína contiene un enlace isopeptídico y es parte de la vía de conjugación Ubl.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno abarca la ubiquitina de longitud completa (aminoácidos 1-228), correspondiente al precursor de poliubiquitina-B. Se espera que este anticuerpo policlonal reconozca tanto la ubiquitina libre como las proteínas conjugadas con ubiquitina, pero también puede detectar cadenas de poliubiquitina. En WB, considere usar condiciones desnaturalizantes y reductoras para distinguir la ubiquitina monomérica de los conjugados de poliubiquitina.
• Para IHC-P, la recuperación de antígeno puede mejorar la detección, y es recomendable usar controles apropiados (por ejemplo, usando muestras de knockdown o knockout) para confirmar la especificidad. La señal puede ser difusa debido a la amplia distribución de la ubiquitina.
• En IF/ICC, los métodos de fijación y permeabilización deben optimizarse, ya que la localización de la ubiquitina varía entre compartimentos. La tinción conjunta con marcadores de orgánulos puede ayudar en la interpretación.
• Los protocolos de ELISA deben incluir curvas estándar utilizando ubiquitina recombinante para cuantificar los niveles de ubiquitina libre o total. Asegúrese de que el anticuerpo esté validado para el formato de ensayo específico y el tipo de muestra.
• El anticuerpo muestra una amplia reactividad cruzada predicha. Para especies no humanas, valide la reactividad en el sistema de muestra relevante, ya que la homología de secuencia es alta pero puede variar.

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