mAb de conejo contra WNK3 - Q9BYP7

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de WNK3

• WNK3 es una serina/treonina-proteína quinasa de la familia WNK (With No Lysine, sin lisina), también denominada PRKWNK3. Actúa como un componente ascendente clave de la cascada de quinasas WNK-SPAK/OSR1.
• WNK3 regula la homeostasis electrolítica y la recuperación del volumen celular mediante la fosforilación y activación de las quinasas posteriores OXSR1/OSR1 y STK39/SPAK en respuesta al estrés hiperosmótico. Referencias relacionadas: PMID:16275911 PMID:16275913 PMID:16501604 PMID:22989884
• En condiciones hiperosmóticas, WNK3 actúa como sensor del apiñamiento molecular y experimenta una separación de fases líquido-líquido para formar compartimentos sin membrana que concentran la quinasa junto con sus sustratos, promoviendo así una transducción eficiente de señales. Referencias relacionadas: PMID:36318922
• Las quinasas OXSR1/OSR1 y STK39/SPAK activadas fosforilan posteriormente los cotransportadores de cationes y cloruros: activan los cotransportadores Na-K-Cl (por ejemplo, SLC12A2/NKCC1) e inhiben los cotransportadores K-Cl (por ejemplo, SLC12A4/KCC1, SLC12A5/KCC2, SLC12A6/KCC3), que en conjunto median el aumento regulador del volumen. Referencias relacionadas: PMID:16275911 PMID:16275913 PMID:16357011
• WNK3 también fosforila WNK4, modulando potencialmente la actividad de NCC (SLC12A3), y puede fosforilar NEDD4L. Independientemente de su actividad quinasa, WNK3 puede actuar como proteína de andamiaje para regular negativamente la localización en la membrana de canales como KCNJ1 y SLC26A9. Referencias relacionadas: PMID:16357011 PMID:17975670 PMID:20525693 PMID:17673510
• WNK3 potencia la entrada de calcio mediada por TRPV5 y TRPV6 al aumentar sus niveles de expresión en la membrana mediante un mecanismo dependiente de la quinasa. Referencias relacionadas: PMID:18768590
• La proteína se localiza predominantemente en el citoplasma.
• WNK3 se expresa ampliamente en el cerebro, pulmón, riñón, hígado y páncreas adultos, así como en tejidos fetales. La isoforma 1 es específica del cerebro, mientras que la isoforma 3 es específica del riñón. Las mutaciones en WNK3 se han asociado con discapacidad intelectual.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a un péptido C-terminal (aminoácidos 1700-1800), dirigido a una región que puede estar bien expuesta y ser adecuada para detectar la proteína de longitud completa.
• Para la transferencia Western, considere utilizar un gel de SDS-PAGE de bajo porcentaje (por ejemplo, 6–8 %) para resolver eficazmente la proteína WNK3 de gran tamaño, de 198 kDa, e incluir marcadores de peso molecular adecuados.
• La reactividad cruzada del anticuerpo con ratón y rata sugiere la existencia de un epítopo conservado; sin embargo, se recomienda validarlo en la especie y el sistema de muestras pertinentes.
• El anticuerpo es adecuado para IHC-P y ELISA, además de WB; se aconseja optimizar los métodos de recuperación antigénica y las diluciones del anticuerpo para cada aplicación y tipo de tejido.
• Dado que la señalización de WNK3 se activa bajo estrés hiperosmótico, considere pretratar las células o los tejidos con estímulos hiperosmóticos (por ejemplo, sacarosa) para mejorar la detección de los objetivos posteriores fosforilados al evaluar la activación de la vía.

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