Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-DARS para WB, IHC-P, IP, ELISA - P14868

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de DARS

• DARS, también conocido como aspartil-tRNA sintetasa (AspRS) y proteína 40 inductora de la proliferación celular, está codificado por el gen DARS1 en humanos. Pertenece a la familia de aminoacil-tRNA sintetasas de clase II, que desempeña un papel fundamental en la traducción de proteínas.
• La enzima cataliza la unión específica de aspartato a su tRNA cognado en una reacción de dos pasos: el aspartato se activa primero por ATP para formar aspartil-AMP, y luego se transfiere al extremo aceptor del tRNA, un paso crítico para la síntesis precisa de proteínas citoplasmáticas.
• Ubicado predominantemente en el citosol, DARS es esencial para suminaristrar aspartil-tRNA para la traducción ribosomal, impactando directamente el mantenimiento y el crecimiento del proteoma celular.
• El análisis de expresión específica por tejido muestra niveles altos en el cerebro en desarrollo y adulto, particularmente en zonas ventriculares/subventriculares, subcampos del hipocampo y la corteza cerebral, con expresión preferencial neuronal. Las neuronas periféricas en el colon también expresan DARS.
• Estudios proteómicos han identificado la acetilación y fosforilación de DARS, modificaciones postraduccionales que pueden modular su actividad enzimática, distribución subcelular o interacciones proteína-proteína.
• Las mutaciones patógenas en DARS se asocian con leucoencefalopatía con afectación del tronco encefálico y la médula espinal y elevación de lactato (HBSL), un trastorno neurológico grave, lo que subraya el papel crítico de la enzima en el sistema nervioso central.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• La secuencia del inmunógeno (aa 222-501) reside dentro de un dominio catalítico conservado de DARS; esta región comparte una alta identidad entre humano, ratón y rata, lo que respalda la reactividad cruzada observada.
• Para la transferencia Western (Western blotting), el peso molecular predicho es de ~57 kDa. Se recomienda validar el anticuerpo utilizando controles positivos como lisados de HeLa, HEK293 o cerebro de ratón/rata, y considerar tanto condiciones reductoras como no reductoras.
• En inmunohistoquímica (IHC-P), la recuperación óptima de antígenos y la dilución del anticuerpo deben determinarse empíricamente. DARS se expresa altamente en tejidos cerebrales; por lo tanto, se recomiendan secciones de cerebro humano o de roedor para la validación inicial.
• Al realizar inmunoprecipitación, la naturaleza policlonal del anticuerpo puede mejorar la captura de complejos nativos de DARS. Incluya controles de isotipo apropiados y pasos de preclarificación para reducir el fondo.
• Para aplicaciones de ELISA, el anticuerpo puede emplearse como reactivo de captura o detección. Se recomiendan la titulación y los ensayos de reactividad cruzada contra sintetasas estrechamente relacionadas para garantizar la especificidad.
• Los modelos de knockdown o knockout pueden servir como controles negativos para confirmar la especificidad del anticuerpo, especialmente en aplicaciones cuantitativas donde es necesaria una cuantificación precisa.

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