Anticuerpo monoclonal anti-ADN Polimerasa gamma para WB, ELISA - P54098

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la ADN Polimerasa gamma

• La subunidad gamma-1 de la ADN polimerasa (POLG) es el núcleo catalítico de la ADN polimerasa mitocondrial, responsable de la replicación de todo el genoma mitocondrial. Sintetiza ambas hebras, pesada y ligera, utilizando plantillas de ADN monocatenario y cebadores de ARN, funcionando como un replisoma altamente procesivo junto con la helicasa TWNK y SSBP1. Referencias relacionadas: PMID:11477093, PMID:11897778, PMID:15917273
• POLG posee una actividad de corrección de pruebas de exonucleasa 3'→5' que corrige sustituciones de bases, adiciones y deleciones de una sola base, garantizando una alta fidelidad durante la replicación del ADNmt. Cuando se produce una incorrecta incorporación, la enzima cambia a un modo de edición nucleolítico para eliminar el nucleótido erróneo. Referencias relacionadas: PMID:10827171, PMID:11477094, PMID:11504725
• Después de completar la síntesis del ADNmt, POLG media la degradación exonucleolítica 3'→5' en la ruptura para facilitar la ligación adecuada, y también presenta actividad de 5'-desoxirribosa fosfato (dRP) liasa, lo que le permite participar en la vía de reparación por escisión de bases mitocondrial. Referencias relacionadas: PMID:9770471, PMID:11477093, PMID:15167897
• Las mutaciones en el gen POLG están vinculadas a un espectro de trastornos mitocondriales, que incluyen la oftalmoplejía externa progresiva (PEO), neuropatías, epilepsia y síndrome de Leigh. Es un gen principal de enfermedad mitocondrial asociado a síndromes de agotamiento y deleción del ADN mitocondrial.
• La proteína se localiza en la matriz mitocondrial y es un componente del nucleoide mitocondrial, donde se asocia con el ADNmt para facilitar su replicación y mantenimiento.
• POLG es una enzima grande y multifuncional (aproximadamente 140 kDa) que pertenece a la familia de las ADN polimerasas de tipo A. Requiere iones magnesio para sus actividades de polimerasa y exonucleasa.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno utilizado para producir este anticuerpo corresponde a un péptido de la región C-terminal (aminoácidos 1140–1239) del POLG humano. Este epítopo se encuentra fuera de los dominios catalíticos y puede proporcionar reconocimiento tanto de la forma silvestre como de algunas formas mutantes. Sin embargo, para cada sistema experimental, verifique la accesibilidad del epítopo en condiciones nativas y desnaturalizantes.
• Para Western blot, el peso molecular predicho es de 140 kDa. Utilice un porcentaje de gel y condiciones de transferencia adecuados para proteínas de alto peso molecular, e incluya un control positivo como lisados mitocondriales de células humanas o de ratón.
• Se ha confirmado la reactividad cruzada con el POLG de ratón, lo que hace que este anticuerpo sea adecuado para estudios en modelos murinos de enfermedad mitocondrial. Debido a la alta conservación de la secuencia, es posible la reactividad cruzada con otras especies, pero debe validarse empíricamente.
• Para ELISA, el anticuerpo se puede usar como reactivo de captura o detección. Titule el anticuerpo para determinar la concentración de trabajo óptima y asegúrese de que el antígeno de recubrimiento contenga el epítopo C-terminal o un fragmento recombinante de POLG que abarque la región del inmunógeno.
• Tenga en cuenta que la expresión de POLG es ubicua, pero se enriquece en tejidos con alta demanda energética. Considere validar la sensibilidad de detección en los sistemas de muestra relevantes, como preparaciones mitocondriales de hígado, músculo o cerebro.

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