Anticuerpo monoclonal anti-ADN topoisomerasa I (TOP1) para WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P11387

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la ADN topoisomerasa I

• La ADN topoisomerasa 1 (TOP1) es una enzima monomérica codificada por el gen TOP1 (GeneID: 7150). También se conoce como ADN topoisomerasa I y se clasifica como una topoisomerasa de tipo IB.
• TOP1 resuelve el superenrollamiento del ADN y la tensión torsional generada durante la replicación y transcisión al escindir y volver a unir transitoriamente una hebra de la doble hélice de ADN, permitiendo la rotación controlada de la hebra rota alrededor de la hebra intacta (Por similitud).
• TOP1 forma un intermedio covalente ADN-(3'-fosfotirosil)-enzima mediante transesterificación, y luego vuelve a unir el ADN después de la eliminación del superenrollamiento; esta actividad es esencial para el metabolismo del ADN.
• Más allá de su función canónica, TOP1 regula el empalme alternativo del ARN pre-mensajero del factor tisular (F3) en células endoteliales y está involucrada en la transcripción circadiana al modular la estructura de la cromatina en el promotor de BMAL1.
• La proteína se localiza en el núcleo, específicamente en el nucléolo y el nucleoplasma, acorde con sus funciones en la transcripción y replicación del ADN.
• TOP1 sufre diversas modificaciones postraduccionales, incluida acetilación y fosforilación, y es un sustrato para la conjugación tipo ubiquitina.
• Se expresa en células endoteliales y se ha relacionado con reordenamientos cromosómicos e interacciones huésped-virus, lo que destaca su importancia biológica y clínica más amplia.
• El peso molecular calculado es de aproximadamente 91 kDa, lo que coincide con la banda observada en el western blot.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El anticuerpo se generó contra un péptido del extremo N-terminal (aa 1–100); por lo tanto, se espera que reconozca TOP1 de longitud completa y también puede detectar variantes del extremo N-terminal. Verifique la especificidad en el sistema experimental relevante.
• TOP1 es predominantemente nuclear; se recomiendan protocolos efectivos de extracción nuclear y fijación/permeabilización (por ejemplo, tratamiento con Tritón X-100) para IHC-P e IF/ICC.
• Para WB, utilice condiciones reductoras; la banda predicha aparece cerca de 91 kDa. Incluya controles positivos apropiados, como lisados de células HeLa o endoteliales.
• Este anticuerpo monoclonal de conejo ofrece alta especificidad y bajo fondo; sin embargo, las diluciones óptimas del anticuerpo deben determinarse empíricamente para cada aplicación y tipo de muestra.
• Los protocolos de IP y ELISA pueden requerir optimización de la concentración de anticuerpo y las condiciones de incubación; considere entrecruzarlo con resina para IP.

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