Anticuerpo policlonal de conejo contra SARS-CoV-2 NSP8 para WB, ELISA - P0DTC2

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la glicoproteína de la espícula

• La glicoproteína de la espícula (proteína S, también conocida como E2, proteína Peplómero) es un antígeno de superficie principal del SARS-CoV-2, esencial para la entrada viral en las células huésped. Existe como un homotrímero y se escinde en las subunidades S1 (unión al receptor) y S2 (fusión de membrana). Referencias relacionadas: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086

• La subunidad S1 se une a los receptores del huésped, principalmente a la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2), iniciando la infección. La unión desencadena cambios conformacionales que conducen a la fusión de membrana, ya sea directamente en la superficie celular o después de la endocitosis. Referencias relacionadas: PMID:34561887 PMID:32075877 PMID:32221306 PMID:34903715

• Receptores alternativos, como la neuropilina-1 (NRP1) y NRP2, las integrinas o ASGR1, pueden mediar la entrada de manera independiente a ACE2, lo que podría explicar el tropismo viral en epitelios olfativos con baja expresión de ACE2. Referencias relacionadas: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059

• La escisión de la proteína S en el sitio S2/S2' por proteasas del huésped, incluyendo TMPRSS2 en la superficie celular o catepsina L en los endosomas, es esencial para preparar la maquinaria de fusión y liberar el genoma viral al citoplasma. Referencias relacionadas: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616

• Como proteína de fusión viral de clase I, S2 sufre un cambio conformacional irreversible desde un estado de pre-fusión a una estructura de horquilla post-fusión, mediado por regiones de repetición heptádica que forman un trímero de horquillas, impulsando la fusión de membrana. Referencias relacionadas: PMID:34561887

• Estudios estructurales revelan que el dominio del tallo de S contiene bisagras flexibles, permitiendo libertad de orientación de la cabeza, lo que puede facilitar el compromiso con el receptor y la evasión inmune. Referencias relacionadas: PMID:32817270

• La proteína de la espícula se localiza en la membrana del virión, en la membrana del compartimento intermedio retículo endoplásmico-Golgi del huésped y en la membrana celular del huésped. Experimenta modificaciones postraduccionales extensas, incluyendo glicosilación y palmitoilación, y es un factor de virulencia clave.

• Palabras clave funcionales incluyen unión viral a la célula huésped, fusión de la membrana viral con la membrana del huésped, proteína de la envoltura viral, membrana celular del huésped, inhibición de la respuesta inmune innata del huésped, superantígeno y evasión inmune viral.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es una proteína de fusión recombinante correspondiente a los aminoácidos 1-198 de la NSP8 del SARS-CoV-2 (YP_009742615.1). Para Western blot (WB), considere usar controles positivos apropiados como lisados de células infectadas con SARS-CoV-2 o NSP8 recombinante. Se recomienda optimizar la dilución del anticuerpo y las condiciones de detección.
• Para ELISA, asegure una recubrimiento adecuado con el inmunógeno o péptidos derivados de NSP8 relevantes. Valide el ensayo con controles de suero positivo y negativo. La naturaleza policlonal puede producir una detección sensible, pero podría requerir una titulación cuidadosa para minimizar el fondo.
• Dado que se confirma la reactividad cruzada para SARS-CoV-2, el anticuerpo puede detectar NSP8 de variantes del SARS-CoV-2, pero se recomienda realizar pruebas específicas para variantes. Considere el mapeo de epítopos si se necesita una reactividad precisa.

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