Anticuerpo policlonal de conejo Acetil-BRD4 (K332) (SWISS O60885) | WB, ELISA - Detección de acetilación de BRD4

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de BRD4

• BRD4 (proteína que contiene bromodominio 4) es un lector de cromatina que reconoce histonas acetiladas, desempeñando un papel central en la memoria epigenética y la regulación de la transcripción. Permanece asociada a la cromatina acetilada durante todo el ciclo celular y ayuda a preservar la arquitectura de la cromatina para la transcripción génica postmitótica. Durante la interfase, BRD4 recluta el complejo P-TEFb a promotores y potenciadores distales, facilitando la fosforilación del CTD de la ARN polimerasa II y la elongación transcripcional. También media la activación de NF-kappa-B al unirse a RELA acetilada y regula la transcripción dependiente de p53.
  Referencias relacionadas: PMID:16109376, PMID:16109377, PMID:19103749, PMID:23086925, PMID:23317504, PMID:23589332, PMID:24360279, PMID:29176719

• Una isoforma de BRD4 funciona como aislante de cromatina en la respuesta al daño del ADN al reclutar condensina-2 a histonas acetiladas, limitando así la propagación de la fosforilación de H2A.X.
  Referencias relacionadas: PMID:23728299

• BRD4 se localiza predominantemente en el núcleo y se asocia con cromatina acetilada y cromosomas mitóticos. Su unión a la cromatina está regulada por el estado de acetilación de las histonas, influenciado por señales como la activación de la vía JNK.
  Referencias relacionadas: PMID:16109376, PMID:21890894, PMID:25593309

• BRD4 se expresa de manera ubicua y está sujeta a extensas modificaciones postraduccionales, incluyendo fosforilación en múltiples residuos de serina (p. ej., S470, S484, S488, S492, S494, S498, S499, S503, S601, S1117, S1126, S1201, S1204) y acetilación en K1111. Este anticuerpo detecta específicamente la acetilación en Lys332, una modificación aún no completamente caracterizada en UniProt pero diseñada basándose en el péptido inmunógeno.
  Referencias relacionadas: PMID:12543779, PMID:18669648, PMID:19608861, PMID:23317504

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético acetilado que rodea la Lys332 de la BRD4 humana, diseñado para garantizar el reconocimiento específico de la forma acetilada. Para Western blot, considere usar extractos nucleares de líneas celulares humanas o de ratón y valide la especificidad con ensayos de competición de péptidos utilizando los péptidos acetilado y no acetilado.
• Para ELISA, el péptido acetilado puede servir como antígeno de recubrimiento. Incluya controles apropiados (péptido no acetilado, pocillos en blanco) y optimice las concentraciones de recubrimiento para obtener la mejor relación señal/ruido.
• La reactividad del anticuerpo puede depender de los niveles de acetilación, que pueden variar con el tratamiento celular (p. ej., inhibidores de HDAC). Considere estimular la acetilación para mejorar la detección.
• Valide el rendimiento del anticuerpo en su matriz de muestra específica; los rangos de concentración inicial recomendados deben determinarse empíricamente.
• Evite ciclos repetidos de congelación-descongelación; alícuote y almacene a -20°C o según lo recomendado.

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